干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请教大家一个Westren Blot的问题 [打印本页]

作者: ind6562 时间: 2012-7-27 15:40 标题: 请教大家一个Westren Blot的问题

各位高人，我要检测的蛋白在细胞核与细胞质均有表达，之前用免疫荧光法检测过了，但我导师说还要定量检测才行，所以我现在想用Westren Blot检测它在细胞核与整个细胞的表达情况。请问有人做过类似的实验吗，如何用Westren Blot专门检测核内的蛋白，内参选b-actin可以吗？

作者: liumenghan 时间: 2012-7-27 16:04

你导师不是要你定量检测蛋白吗？用western不好定量吧…用ELISA比较好吧! J) n4 S, H3 o4 b2 N* l
如果一定要WB的话，只能用标准品蛋白设置个梯度，最后只能杂出个大体浓度范围。

作者: ind6562 时间: 2012-7-27 16:15

回复 liumenghan 的帖子
% |& J# k3 u+ { Z Z
相对定量就可以了，ELISA不是检测胞外蛋白的吗？

作者: liumenghan 时间: 2012-7-29 18:41

回复 ind6562 的帖子

我以前看过一篇做核内binding protein的用的是ELISA。如果只是相对定量的话用不着了
我前段时间检测过胞浆蛋白，用试剂盒，实现胞浆蛋白和细胞核分离，你可以找份说明书看看。
我也是新手……希望能对你有点儿帮助。

作者: BenHantun 时间: 2012-7-30 16:07

这样的话是不是分别提取核和胞质，再从核和胞质中分离蛋白，如果做细胞的话，细胞最好多一些。内参能不能用组蛋白当内参呀，这个我不确定，你在问问别人

作者: ind6562 时间: 2012-7-30 16:21

回复 BenHantun 的帖子
4 y( R' M7 U5 D9 ^) k9 _0 ~
我刚看了文献，有人用HISTOE H2A作内参，谢谢啦~

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-7-30 17:45

western最多也只能算半定量吧

作者: Donnies 时间: 2012-10-23 11:00

核内蛋白，我们一般选tublin的

作者: jl860822 时间: 2012-12-5 12:09

做免疫组化吧，可以很清楚的看出来

作者: naturehu 时间: 2015-1-15 22:18

细胞核的话能够用细胞核蛋白的提取试剂盒。

作者: cellprobe 时间: 2017-3-27 02:25

可以先用试剂盒分离核内蛋白，然后用Histone 2A或者tubulin做内参。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)