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标题: MEF用丝裂霉素C处理第二天就崩盘 [打印本页]

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-1 12:25 标题: MEF用丝裂霉素C处理第二天就崩盘

MEF用丝裂霉素C处理第二天就崩盘，用的是海正药业的临床注射用丝裂霉素C，加的浓度是10ug/ml 一小时或7ug/ml 3小时。有没有人遇到过这种情况，望解析。

作者: zmm 时间: 2012-8-1 13:06

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一般都用sigma或者罗氏的。你所说的崩盘是什么意思？怎么还用上炒股的词汇了？还有你处理的时间有点短，一般是10ug/ml 2h。

作者: yuhaoze 时间: 2012-8-1 14:43

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-1 16:48

回复 zmm 的帖子" k, E( R7 e4 l" A

第二天找不到细胞了。细胞全部变成碎片了。

作者: future007 时间: 2012-8-1 17:01

遇到过，细胞都挂了，但是重新做了就没事了，不知道为什么，后来分析可能是丝裂霉素没有混匀，所以后来就把丝裂霉素放在培养液里混匀了再加到培养皿中。

作者: zmm 时间: 2012-8-1 20:08

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这个我还真么遇到过。你处理后多洗几遍。

作者: frankieisme 时间: 2012-8-2 02:03

最好还是买标准品做吧,临床用药大多含有制剂的辅佐剂,说不清是什么原因造成的.

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-2 12:03

我已经好几批都这样了。及时第二天没有马上全死，之后几天也是慢慢漂浮变碎片的。大家丝裂霉素都用什么溶解呢？

作者: wawj 时间: 2012-8-2 12:09

回复刘森泉的帖子3 s' ^& \7 d5 C1 e/ Z# {3 H
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我用ＰＢＳ溶的

作者: zpzp0312 时间: 2012-8-2 12:55

还是用sigma的吧$ @* r$ j: n: [: n
从未遇到楼主这种情况

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-2 14:13

回复 wawj 的帖子! z2 [! ?8 B& N0 w `
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用PBS能完全溶解吗？我的用水溶，还有小片状么。

作者: huangcong1988 时间: 2012-8-2 17:45

回复刘森泉的帖子0 J* C& H* }. J i

我养mef，传两代就污染了，细胞里面全部都是沙子样小黑点，怎么回事呢？分的时候还是很好啊

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-3 13:14

回复 huangcong1988 的帖子1 _9 G h( x" f7 _; N

污染得原因多种多样，不能确定，能做的就是把PBS，胰酶，培养基全部换掉，重新复苏细胞试试。

作者: huangcong1988 时间: 2012-8-3 16:27

回复刘森泉的帖子; R8 ~! O2 A( m, |# H. O
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还有就是我分了MEF之后冻存，结果怎么复苏也复苏不起来怎么回事呢？程序冻存盒，冻存液也很好

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-3 19:20

回复 huangcong1988 的帖子! Q# T! z( i# I1 [
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用同样的方法冻存下293T这些较好养的细胞，证明冻存方法OK的情况下只能看你的细胞状态了。

作者: wbj1983 时间: 2012-8-8 16:48

1、MEF传代次数一般P3-5，不适合用代数太高的。
2、丝裂霉素C最好用sigma-M0403-2mg的。
3、2mg丝裂霉素C先用PBS溶解均匀，一般避光混匀5-10min，再加到培养液中，工作浓度10ug/ml。
4、处理时间2-2.5小时不能超过3小时。注，处理2-2.5小时后用PBS洗2次，此步骤很重要！
5、冻存时如果经费充裕的话可以用10%DMSO+90%FBS，效果能佳。- |6 b% n4 J& V9 _( y0 K2 q. S
这是自己做Feeder的经验，大家可以参考，如有问题可以继续交流。

作者: wbj1983 时间: 2012-8-8 16:52

回复刘森泉的帖子$ {8 @' k8 Y3 j" m6 a1 N1 J
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1、MEF传代次数一般P3-5，不适合用代数太高的。, d* U' C7 E6 u. I3 @
2、丝裂霉素C最好用sigma-M0403-2mg的。
3、2mg丝裂霉素C先用PBS溶解均匀，一般避光混匀5-10min，再加到培养液中，工作浓度10ug/ml。
4、处理时间2-2.5小时不能超过3小时。注，处理2-2.5小时后用PBS洗2次，此步骤很重要！
5、冻存时如果经费充裕的话可以用10%DMSO+90%FBS，效果能佳。; k6 D) z% D% {; [
这是自己做Feeder的经验，大家可以参考，如有问题可以继续交流。

作者: wbj1983 时间: 2012-8-9 11:34

上面的丝裂霉素C是：sigma-M0503-2mg的
打字的时候打错了，非常抱歉！

作者: bibottll 时间: 2012-8-10 11:56

我才做过的，细胞长得很好啊，5微克/微升，PBS溶解，处理三个小时后用PBS冲洗5-6次

作者: 开心果王 时间: 2012-8-13 09:35

我一直用的是海正的，没有发现细胞全死掉了的现象，我们一般处理后就消化计数并冻存起来了，并没有继续培养，只是在复苏后会发现有死细胞漂浮，但贴壁的细胞还不错啊！我是用PBS配的，不知道楼主是否某个环节出现了失误还是什么其他的原因，可以将自己觉得疑惑的地方跟大家分享一下。

作者: dwy 时间: 2012-8-14 15:17

我用PBS和DMSO溶解的，暂时没有问题。

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