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标题: 大家帮忙看看这是什么污染，能怎样解决？ [打印本页]
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 15:06     标题: 大家帮忙看看这是什么污染，能怎样解决？

现在这一段时间不知怎么了，养什么什么污染，MEF,293T，什么都污染了，貌似是同一种污染，就是小黑点，像沙子一样的，下面附图
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 15:09

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各种污染
作者: jxmudby    时间: 2012-8-8 15:31

      野下是不是很多连个米粒样的东东连在一起，一头大一头小啊，有时仔细看还在动一样？最近我在养内皮祖细胞时，大鼠骨髓原代分离的细胞养个2-4天就出现这样的情况，然后细胞都成团漂浮起来，具体情况见链接：http://www.stemcell8.cn/thread-58696-1-1.html，
! w2 x, |  v0 t% L     问了几个人都说是污染，可是就不知道是啥菌？还有说是原胶虫污染？不懂！结合最近一次的情况来说，考虑是培养基污染的可能性较大。（当初是买来的培养基和细胞因子、血清、双抗什么的一套，就一起混匀分装，最近用的一两个小瓶子培养基出现上述情况？）不知道每次换液时都将培养基滤过一样，是不是能避免污染呢，唉！
作者: 文文2012    时间: 2012-8-8 16:08

你可以放大了再看看
作者: 文文2012    时间: 2012-8-8 16:11

你可以放大了再看看
作者: 文文2012    时间: 2012-8-8 16:12

你可以检测下是不是血清的问题
作者: zlei0222    时间: 2012-8-8 16:19

thanks
作者: wangshumin12311    时间: 2012-8-8 16:45

拍的不是很清楚，不过从最后一张图来看，极有可能是细菌污染，如果过夜培养培养基都黄了也浑浊了估计就是细菌，，，，如果一切正常还有些颗粒，那也有可能是培养基血清或者细胞分泌物或者细胞随便，总之一切皆可能，呵呵
作者: wcforever126    时间: 2012-8-8 16:46

本帖最后由 细胞海洋 于 2012-8-9 00:58 编辑 3 e. f+ U! _; _& y  V
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应该是黑胶虫，首先说明这种东西在低倍下呈黑色点状，在高倍下呈杆状，确实是在不停地运动的，有些战友不相信它会动，也有人不相信有这种所谓的“黑胶虫”，只要静下心来仔细盯住一点，你就会能注意到它确实在运动。
" D' e# `2 u9 Z& k, L+ W3 j据说新洁尔灭与水或培养基的比例为1：4时即可杀死“黑胶虫”，这个没尝试过。这些东西还是要小心。
8 F; S6 ^: i  x7 m6 I8 Q  E0 l% P5 y, i' B. o4 y2 A5 j& f
补充内容 (2012-8-8 21:37):& J6 W& j3 g% K' R0 {3 i$ w
出处http://shiyan.ebioe.com/2122.htm
作者: wcforever126    时间: 2012-8-8 16:48

回复 jxmudby 的帖子/ ?  V' J& A9 w0 \1 ?: Y

: k+ O, M7 d" I! g4 t9 O' v您不知道培养基和细胞因子及双抗都是分开装的吗？用的时候去你用的量即可。
作者: wcforever126    时间: 2012-8-8 16:50

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" J9 y* d9 x( z% O: v' j$ ?  t2 a
% S' _  h6 k- L2 x4 ]2 I8 O* W不能混匀再分装，细胞因子及双抗要在-20度保存，培养基4度即可，混装后你也不能保证短时间用完。
作者: 不倒翁    时间: 2012-8-8 18:23

沙子一样就是细菌污染了) E* m3 ]% L& e( o
作者: 细胞海洋    时间: 2012-8-8 19:20

回复 wcforever126 的帖子0 K+ ~, g6 y: u! b- m

. x9 c( I2 b% l  |转帖请注明出处
作者: 626630192    时间: 2012-8-8 21:30

遇到这种小颗粒有很多情况吧..有可能是污染就像前面的人说的黑胶虫的污染...还有一种情况是你的细胞死了,然后细胞里面的线粒体泄露,这种情况也是有的,因为线粒体的大小刚好可以做布朗运动，这种情况也有发生，.....如果是前者的话,没办法呀,重做呗,实验小心,.......你可以考虑去处一部分细胞分盘,如果黑颗粒在继续增多,就是污染了,如果短时间没有变多,那可能是细胞死了....
作者: 626630192    时间: 2012-8-8 21:32

回复 wcforever126 的帖子# O( w  X" @4 F9 r. p. k# b

5 F- k, [9 z9 E最好是别考虑杀死黑胶虫什么的,因为你处理完之后,对你的细胞绝对有影响,真是污染果断重养.....
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 21:44

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很多人说这个是细菌或者黑胶虫，我觉得应该不是黑胶虫，首先，在低倍镜下，黑胶虫看着是没那么大那么明显的，然后，如果仅是黑胶虫污染的话，细胞密度大了，细胞就能长起来，而且黑胶虫是个国际性的问题，哪个细胞室都无法避免！细菌倒有可能，但是每次都这么污染，我就想找到污染源，想从源头解决问题，不然老这么着，我的实验没法做了，细胞老养不起来，分了几次MEF了，分的时候都很好，但是一传代就污染，根本没法做实验，冻存复苏又活不了，哎
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 21:44

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# m9 S) q! E2 t$ H( Z) L' |4 I0 ~0 B0 F1 Q. {: S" @6 X
血清换了好几批了，而且每次血清都滤的
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 21:45

回复 wangshumin12311 的帖子% O8 M9 J; M  O( R, L" `0 [
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培养液颜色都是正常的，也没有浑浊，就是细胞不贴壁了，瓶底就是这么多这种沙子一样的东西，烦死了，哎
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 21:47

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$ Y. f* D; x0 d8 i/ Z
- M$ h( X( v9 s% I; Y7 ]说实话，黑胶虫是灭不了的，哪个实验室都无法避免这个问题，只能说尽量减小其危害，个人觉得不是黑胶虫
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-8 21:47

回复 不倒翁 的帖子. h0 k3 _* l- [* O1 ?' d

2 b' R8 }) k0 w& c( M+ h& L怎么解决呢？怎么处理呢？谢谢
作者: 不倒翁    时间: 2012-8-9 09:01

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# T  z4 n8 u/ L8 ~! O看上去你的情况还很严重 首先排查问题所在 大方面无非就耗材跟细胞本身了 先检测一下培养基 加一点培养基到培养皿里放在培养箱里 几个小时以后去看看有没有浑浊   显微镜先观察一下有没有污染物 如果没有的话就可能是细胞本身的问题了 有可能你们冻细胞的时候污染了 所以每次复苏的细胞都有问题  一旦污染了的话就没得救了 很难恢复过来 加双倍的双抗可能能让细胞多活一阵子 但是迟早会爆发的 所以只能是彻底打扫卫生 然后所有东西都换新的 如果是细胞本身的污染的话找别的实验室要一点没有问题的细胞重新开始养6 F; R3 C# s, y4 D7 X$ B" b3 a
作者: 不倒翁    时间: 2012-8-9 09:07

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0 k! r4 Z: [0 y) X! t& Q
' m: [3 W* p+ x看上去你的情况还很严重 首先排查问题所在 大方面无非就耗材跟细胞本身了 先检测一下培养基 加一点培养基到培养皿里放在培养箱里 几个小时以后去看看有没有浑浊   显微镜先观察一下有没有污染物 如果没有的话就可能是细胞本身的问题了 有可能你们冻细胞的时候污染了 所以每次复苏的细胞都有问题  一旦污染了的话就没得救了 很难恢复过来 加双倍的双抗可能能让细胞多活一阵子 但是迟早会爆发的 所以只能是彻底打扫卫生 然后所有东西都换新的 如果是细胞本身的污染的话找别的实验室要一点没有问题的细胞重新开始养
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作者: wangshumin12311    时间: 2012-8-9 20:29

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. Q* U! _/ i) z1 A- `' ^黑礁虫这种东西都没有定论，有条件查一下是不是支原体污染，，，可以购买Plasmocin加双抗看有无效果，，，细胞不珍贵直接扔了算了。
作者: sirius_zou    时间: 2012-8-14 14:49

huangcong1988 发表于 2012-8-8 15:06
8 h% C! n( M0 ~' n) d# c, x现在这一段时间不知怎么了，养什么什么污染，MEF,293T，什么都污染了，貌似是同一种污染，就是小黑点，像沙 ...

- r% F7 ~, J$ F1 blz，我遇到的问题和你的一模一样，MEF出现流沙状，培养基颜色不会变。
' k; b4 e/ u# p8 K' J8 x刚开始怀疑是培养基污染，但是只加培养基37度放几天镜检又没有问题。
" N! v3 k2 ?( _( ^7 C# [最后所有东西都换了才好，损失惨重啊
作者: linda9958    时间: 2012-8-23 22:49

我也遇到这样子的，培养基过夜没变色，小点点也貌似米有增加的迹象，就是不知道怎么来的，但是不是很严重，消化细胞的时候，我换瓶子了，细胞也收集离心，洗过一遍再放回瓶子去 。
作者: iamcyy1224    时间: 2012-8-24 09:43

细菌污染 扔了吧
作者: sdyinong    时间: 2012-8-24 11:25

这个我培养细胞的时候也遇到过，应该不是黑胶虫，有点像酵母污染，用点抗真菌的药物试一下，用制霉菌素和两性霉素B试一下，我之前用过，效果还可以，不过对细胞的毒性也挺大，你可以试一下
作者: zh116z    时间: 2012-8-24 11:38

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我养的悬浮细胞也出现了这种情况，底像是铺了一层沙，但是同时养的其他类细胞就没有这种现象呢，血清、培基什么的都是用的同一批次的。是不是在冻存时发生的呢？
作者: smallbite    时间: 2012-8-24 22:08

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( t2 |& X- L) K% J4 D7 s5 r: `; W9 K9 `0 T
黑胶虫具体是什么东西？细菌？
$ I- ~8 w9 O6 Z9 c新洁尔灭杀完后细胞还能用？



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