干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 脐带间充质干细胞鉴定问题 [打印本页]

作者: 米儿2003 时间: 2012-8-10 10:43 标题: 脐带间充质干细胞鉴定问题

脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高，求教！

作者: firstaider 时间: 2012-9-26 00:18

这应该是目前公认的标准了. `' Q& `0 O& }/ l( ^
1、细胞形态检测
  倒置显微镜下直接观察，培养瓶中的贴壁细胞为成纤维样，漩涡状生长。: Y6 t: L4 X7 k* o$ ?) ?2 I
2、表面标记表型分析
  CD29、CD44、CD73、CD90和CD105阳性，阳性率不低于95％；& k7 m# p6 b0 ^/ A3 X1 E7 B8 c  t
  CD34、CD45、CD31和HLA-DR阴性，阳性率不高于2％。
3、多向分化特性：在诱导培养条件下，细胞应能向脂肪、成骨分化。

作者: firstaider 时间: 2012-9-26 00:19

不同来源、不同发育时期的MSC，表型是有差异的，有可能是你细胞或者培养基的问题

作者: qiang0206 时间: 2012-12-11 19:42

回复 firstaider 的帖子( v2 _- _3 N4 O

请问兔间充质干细胞鉴定能用这个标准吗？抗体必须用抗兔的CD29等，还是可以用抗人的CD29等吗？谢谢回复！

作者: yinfuhua 时间: 2012-12-11 22:12

这是我制备的脐带间充质干细胞。

作者: hcoohboy 时间: 2012-12-12 10:37

从形态看，有点偏成纤维细胞，个人觉得，你的脐带MSC可能有点分化了。你传了多少代？用什么培养体系？

作者: pipi168 时间: 2012-12-12 10:39

过度分化细胞，培养基的问题

作者: askage 时间: 2012-12-12 11:41

请发流式图，有图才好分析。
如果确定是1个峰，无亚峰，那么说明是比较均一的细胞群。如果其他指标均正常，仅这2个指标异常。请核查下你的样本制备过程、所用试剂有效期。制备过程尽量快，避光。洗涤最好3次，请用PBS。
对于体外培养的MSC，阴性指标，容易出现非特异性沾染，多洗几次就掉下去了，比如CD45。阳性指标是洗不下去的，顶多降低个0.1-0.2%.

作者: likj12 时间: 2012-12-12 12:43

回复 firstaider 的帖子
* a" h! S+ b, w3 B7 S5 p
您好，想问一下，您2中他提到的这些biomarker在干细胞分化后还能看到吗？9 _: `- J0 Y. ^
多谢了

作者: uslzhang 时间: 2012-12-12 13:53

楼主的问题是“”脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高“，属于定量了，既然是定量，那就需要对检测条件进行验证，例如抗体加入量，孵育时间，孵育温度等。

作者: yinfuhua 时间: 2012-12-12 16:27

回复 hcoohboy 的帖子. ^5 Z1 u: s, |- K4 Q& p
# D" Z( c% P) L0 i$ W$ ~* [1 y
第二代，第3天。用无血清MSC专用培养基（不加因子）。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)