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标题: 请教如何用磷酸钙法包装慢病毒啊？ [打印本页]

作者: hhs359853381 时间: 2012-8-13 14:17 标题: 请教如何用磷酸钙法包装慢病毒啊？

请教如何用磷酸钙法包装慢病毒啊？谁有具体的实验步骤求一份

作者: igdb 时间: 2012-8-14 10:28

按照厂家提供的PROTOCOL就可以。。碧云天的就不错，挺好用的。而且很便宜。

作者: shy8610 时间: 2012-8-14 12:46

楼上正解

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-17 11:21

回复 igdb 的帖子
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我用碧云天的磷酸钙转染试剂，按照说明书做的，将质粒DNA加到100ul氯化钙里，再加到100ulBBS中，8h换液，第二天发现细胞还在增殖，转染前70%，第二天长满了，而且细胞还是很多触角的，没有变圆。这是怎么回事？谢谢。

作者: igdb 时间: 2012-8-20 16:39

回复刘森泉的帖子# m. O0 n0 J; ]
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谁说的转染后细胞就不长了？？你转染的是293嘛？磷酸钙法只适用于293细胞系。如果是293的话，细胞长出触角说明状态不好了。。培养过程中不要加抗生素。" y7 A' S; o0 L" {* e+ Y0 Y' c

关键问题是，你的转染效率怎样？？

作者: 刘森泉 时间: 2012-8-20 20:53

回复 igdb 的帖子+ Q9 I5 U; n# p9 \
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转的是293，第一天还会长，第二天就不长了，转染效率比较低，大概60%左右

作者: linda9958 时间: 2012-8-24 09:13

磷酸钙转染293一般都能达到80%，所以转染的试剂都可以自己配的，2MCaCl2，还有2XHBS（8.0 g NaCl 6.5 g HEPES (sodium salt) 10 ml Na2HPO4），一6cm皿为例：加入10ugDNA+438ul H2O + 61ul CaCl2混合，再加入500ul 2XHBS，混匀加入细胞中，6小时换液，加入含甘油的1XHBS休克30秒到2分钟，然后正常培养即可。整个过程的培养基可以有血清，有抗生素~

作者: kaphila 时间: 2012-8-25 14:20

我一般在50%时做转染 16小时后换液那时细胞大约长到80% 个人认为细胞长满的话不太好

作者: nculsa747 时间: 2012-9-10 11:53

磷酸钙转，效率怎么也得有90%左右吧。

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