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标题: 脐血MSC混合的杂细胞——破骨样细胞？ [打印本页]

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作者: huajie881026    时间: 2012-8-13 16:39     标题: 脐血MSC混合的杂细胞——破骨样细胞？

第一次和第二次分离脐血原代MSC均未见到梭型细胞，除了脐血量不足未找到其他失败原因，故摸索着做额第三次。第三次脐血原代至今刚好十天，培养瓶中可见到一定量的梭型细胞，考虑可能为MSC，但未形成cluster，故还不明确。但是有种杂细胞很多，也贴壁，看着似乎会影响MSC的扩增。请教：这就是所谓的破骨样细胞吗？为何也在淋巴细胞层？做原代的时候有什么方法能将这种杂细胞减到最少呢？
+ Z! m+ A6 a& L  P1 B100×. k$ P, Z" b  R8 d1 c4 a
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' h- ?9 K3 |: b100×7 m' I2 {& j3 S6 n* `
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作者: meister    时间: 2012-8-13 16:42

没做过， 是DC细胞吗，DC细胞也会贴壁生长

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-13 16:46

你是说视野中间那些超大个的细胞吗？

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作者: huajie881026    时间: 2012-8-13 18:13

小猪快跑 发表于 2012-8-13 16:46
+ x! z  ]! j$ @' @8 f( I5 t! C6 X3 ?$ ~你是说视野中间那些超大个的细胞吗？

) E% m. L% w% b* c  Z, d对的

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作者: pailishi    时间: 2012-8-14 08:41

你这应该不对，我们一般7天左右就长MSC克隆了，而且增殖很快的

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-14 09:34

回复 huajie881026 的帖子
# ]/ W  n9 {! b* i- d  W2 o, {$ k* N& b: T) O
我们养的骨髓的MSC也出现过这种细胞，不知道是什么细胞，它会变得特别大，占用MSC发展空间，把MSC挤成一个区域一个区域的，传代时它不会被消化下来，因此就被筛选出来了，就是原代培养特别占空间，能有什么方法在原代时就去除，期望能够得到解决，共享。。。。。

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作者: huajie881026    时间: 2012-8-14 09:44

pailishi 发表于 2012-8-14 08:41 + T& ?; S+ K0 H$ t  r# D8 i% E8 [
你这应该不对，我们一般7天左右就长MSC克隆了，而且增殖很快的

: J8 F$ |4 I' E
我也知道一般1周左右就形成克隆集落了，但是细胞的确在增殖，只是速度比较慢，而且我觉得上图中的杂细胞会不会占空间，不利于MSC的增殖？

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-17 14:11

楼主，你那疑似破骨细胞样的细胞后来长成什么样子了？有没有变得特别大啊？很关注。。。

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作者: huajie881026    时间: 2012-8-17 16:02

回复 小猪快跑 的帖子& [- T7 L  j" M& T% Z9 o+ J
6 h( n- ?" M* F% r- x
我上个图吧，这种细胞依然存在, K5 X8 e$ U+ I- ?
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. W( Z1 K2 ~) v& A9 X细细看来这周围的成纤维状细胞貌似不是MSC，破骨样细胞并没有挤着成纤维状细胞，但他们却没有形成集落。
! u1 u0 t- T) ]1 {另一瓶里面就有细胞集落2 Z' p: S. F; c
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! B, `: J# Q; W3 w; ?唉 这种圆圆的细胞真不知如何是好

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-17 19:29

; e. a5 H* T: k$ M- H+ s
. K0 p6 H4 D9 o: p1 M+ M
你这是原代吗？哎，我的细胞跟这个相似，我也传张图

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-17 19:29

3 g! H. I/ \9 i0 A8 z1 e& T

0 I6 A' W4 f1 }# w& M回复 huajie881026 的帖子6 A4 P+ B/ ^: K7 x" O9 N

8 L( Y  p8 R& K5 b+ [' l: u( Y; g你这是原代吗？哎，我的细胞跟这个相似，我也传张图

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作者: huajie881026    时间: 2012-8-17 23:30

回复 小猪快跑 的帖子
1 ~8 v7 Y( m# @7 f7 Y0 A& \2 ~% L( O" K' `, }, T
你这杂细胞看上去比我的杂细胞小多了，我的真的是非常之大！

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作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-18 08:55

回复 huajie881026 的帖子
/ R7 Z6 k$ h- P4 |+ Y* u& z4 z+ F- c; Y7 g5 `, X" H
我是没照特别大的地方，大的跟块空地似的，看来咱俩的很像啊！

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作者: varing    时间: 2012-10-30 19:39

是煎饼状的巨噬细胞

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作者: fay898    时间: 2012-11-1 16:29

您好，我刚开始养脐血间充质细胞，请问下10cm的培养皿一般养多少细胞呢？10^8？！还是80ml或者100ml脐血分出来的细胞铺一皿呢！？

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作者: huajie881026    时间: 2012-11-1 16:37

回复 fay898 的帖子! ~& J# F# k5 j
5 e2 \# ^$ T# ]
按2* 106/cm2铺皿
  D- v! _- W0 h8 e: `1 o

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作者: xiaocell    时间: 2012-11-1 16:39

我们的MSC也很多这种细胞,但是我们不是从脐血里取出来的，我看文献上说的好像脐血里取MSC很难取得到，还没试验过

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作者: fay898    时间: 2012-11-1 17:55

回复 huajie881026 的帖子
" J. V1 G0 F; k" }7 P3 \3 k, \0 ~( _  o" ?  \7 t& z4 e
谢谢！

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作者: xuzhijuan1989    时间: 2012-11-1 22:57

各位大侠好，我也在养脐血MSC ，在分离过程中也遇到和楼主一样的问题，其中圆圆的细胞会越长越大，而且MSC不太会长。不知道楼主脐血MSC培养成功了吗？我至今还没有养出来，希望可以和各位大侠交流

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作者: huajie881026    时间: 2012-11-2 00:33

回复 xuzhijuan1989 的帖子
) r% T4 `8 y9 K! T7 I; |# v
4 G( }1 j# t  P3 F2 vCB-MSCs我养了10多次才成功过一次，CB里面MSCs含量的确比较低的，最近在努力寻找提高成功率的方法。。。。
" V0 h7 q6 P  w& z/ g: n4 z& N

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作者: xuzhijuan1989    时间: 2012-11-2 21:47

回复 huajie881026 的帖子
" U9 N9 T$ E9 o; t+ r/ u. u9 z- ~  Q8 N! `+ K. _1 O
你好，能请教下你是用什么方法分离吗？我用密度梯度离心分离了好几十份标本也成功，培养基也从gibicol换到stemcell间充质干细胞培养基，也没什么效果，最近信心很受打击

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作者: xuzhijuan1989    时间: 2012-11-2 21:56

回复 pailishi 的帖子
+ p# U" \' h1 H! l3 @/ a$ o; J; ]
' W3 P1 B1 B; R* `% `8 d你好，请问你也在养脐血MSC吗？我用密度梯度离心法养了4个月了都没有成功，能不能分享下你的分离培养方法，谢谢!

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作者: huajie881026    时间: 2012-11-2 22:39

回复 xuzhijuan1989 的帖子( N% G9 w7 Q: W1 [: l) B

- S/ Z3 W+ h$ q2 V8 ~6 o我养了10份也才成功一份，你可以试试免疫磁珠分选，或者加一些LIL-3、GM-CSF、氢化可的松、bFGF等试试再摸摸条件，一直那种条件养几十份标本太浪费了，我做了十份才成功一份就开始找原因了。。。多看看脐血的别人的文献，看条件是否和你一样，自己能否改进。。。

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作者: xuzhijuan1989    时间: 2012-11-2 22:44

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0 _$ S! N$ c/ W, r; I" @: F3 [8 a  G8 L  t4 |+ Y% i* ~
恩，是啊，浪费标本，浪费试剂，

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