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标题: 请问大家如何制备的肿瘤细胞裂解物 [打印本页]

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-14 13:14 标题: 请问大家如何制备的肿瘤细胞裂解物

在DC研究中，在DC细胞成熟前要进行肿瘤抗原负载，想请问大家是怎么制备的肿瘤细胞株裂解物，就是如何对肿瘤细胞进行裂解的，若有具体步骤更好或者文献，谢谢大家！

作者: ly200101042 时间: 2012-8-14 16:45

匀浆器搓

作者: lxm5668 时间: 2012-8-15 08:02

我们在裂解肿瘤细胞和非肿瘤是用的方法相同。因为细胞裂解关键在于抑制蛋白的降解，细胞破裂后一些蛋白酶会与蛋白相遇，发生蛋白降解，会给实验结果造成误差。采用机械的方法和化学的方法都可以裂解细胞，看细胞量的多少。多的话可采用机械，比如超声破碎法，少的话一般用“细胞裂解液”，所有的方法关键在于要加“蛋白酶抑制剂”！细胞裂解液的配方在“分子克隆”第二第三版上都有，有单去污，双去污、三去污细胞裂解液的不同配方，在此不提供了。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-15 08:37

回复 lxm5668 的帖子

我看有好多人是采用液氮反复冻融裂解，然后进行离心，这种方法会造成蛋白的讲解吗？

作者: lxm5668 时间: 2012-8-15 08:41

回复莫邪小仙的帖子) X) e! Y$ b8 @4 D$ |
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采用液氮反复冻融裂解也可以呀，但是裂解后还是存在蛋白酶遇到蛋白的问题呀，不加蛋白酶抑制剂就会发生蛋白降解。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-15 08:44

回复 lxm5668 的帖子4 ]3 I! P$ U$ r: X$ Y7 J: s
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那蛋白抑制剂要在冻融之后加还是冻融之前加？请问你们具体是怎么做的，能方便透露吗？要是方便的话加我球球聊把，给指导下283509942

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