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标题: 大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化细胞层剥落 [打印本页]

作者: sunxiaoyi 时间: 2012-8-15 09:44 标题: 大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化细胞层剥落

[attach]45113[/attach] 诱导3天
[attach]45112[/attach] 诱导前$ T0 Z2 [3 c l( {4 a1 W7 g* p
成骨诱导3天后的照片，再诱导下去到第七天的时候细胞就掉下来了，细胞数变多，并没有见到细胞形态变成鹅卵石样。不知道同志们成骨诱导什么时候能见到形态发生明显的变化了？

最近刚开始接触MSC，做大鼠MSC成骨分化的时候遇到了麻烦，用2-3代MSC100000个接种到3cm培养皿中，第二天开始诱导（10-8mol/L地塞米松，50ug/ml维生素C，10mmol/Lbeta甘油磷酸钠，10%FBS），每三天换一次液，到了第5-6天细胞长得已经很满，镜下观察没有明显的多边形细胞产生，仍然为长梭状形态。第7天细胞层整个卷起来，脱落下来了。本来打算诱导2-3周做染色的，现在也做不成了。另外，在24孔板（种板密度5*104/孔）里也发生了一样的情况，不知道哪里出了什么问题？
问题可能很弱智，请高手指点。感激不尽！

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-15 09:50

没见过，关注！

作者: sunxiaoyi 时间: 2012-8-15 14:47

自己顶，是不是细胞的问题，老化了？

作者: huajie881026 时间: 2012-9-28 11:53

没铺明胶吧，我也碰到过这个问题

作者: yedanna 时间: 2012-9-28 20:07

我用的细胞密度是5000 cells/cm2 ，明胶包被过的6孔皿，液体由10% FBS，50 μM ascorbic acid, 100 nM dexamethasone 和 5 mM KH2PO4组成，第一天就用此液体诱导，隔天换液，诱导21天。细胞一直在增值，出现明显细胞形态变化大概在1星期以后，如果细胞密度太大，这个变化很难观察到。
LZ出现的细胞脱落是不是因为细胞密度太大了？

作者: yanzhaoii 时间: 2018-12-24 16:10

细胞密度太大了，有两个解决方法：一，铺板前明胶包被；二，种植细胞数减少，12孔板在2万左右，6孔板在4-5万左右

作者: cmw930922 时间: 2019-1-9 18:42

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我想问问，你的成骨诱导液是自己配的还是买成品的？

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