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标题: 人间充质干细胞成骨分化细胞死的厉害，什么原因呢？ [打印本页]

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-16 22:56 标题: 人间充质干细胞成骨分化细胞死的厉害，什么原因呢？

正在做人间充质干细胞成骨分化诱导，4天左右就死光了，大家之前有没有遇到过，帮忙看看是什么原因？另外想要一支人的间充质干细胞，大家谁能帮下忙，或者推荐购买的地方也行，新手，完全的菜鸟一些，向大家求助！我的手机13654370281，Email：liuzw1117@gmail.com

作者: 细胞海洋 时间: 2012-8-17 08:00

请说明试验方法建议上传图片

作者: 飞翔的十字架 时间: 2012-8-17 08:17

成骨分化protocal很简单明了的，搜一下帖子，先看看个试验步骤有无问题，试剂有无问题，还有细胞状态，或重复实验

作者: huajie881026 时间: 2012-8-17 08:45

cyagen有专门的细胞株卖，不过很贵。1×10*6大概几千块钱，还是自己养的好吧，就花点时间

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-17 09:02

怎么会死了呢？不可能吧？是不是染菌了你没发现啊？还有操作步骤怎么样的呢？

作者: 漂泊的风 时间: 2012-8-17 09:39

买成骨诱导液吧，诱导效果很好的，比自己配置的效果好多了。

作者: katysong 时间: 2012-8-17 10:04

我们实验室的摸索条件如下，仅供参考：
（1）消化处于对数生长期的hMSCs细胞，计数并按5*103/cm2接种到12孔板[接种浓度太大也会引起细胞间的接触抑制]，每孔的培养体积为1.5ml（干细胞培养基），待细胞生长24h后换成BDM（成骨分化培养基，加入b-磷酸甘油钠、抗坏血酸和地塞米松三种化学因子）诱导，每隔3-4天换液1次；$ x' \" E+ B! b2 D; K0 b
（2）hMSCs的成骨分化周期较长，一般需要14-28天；随时间延长，用茜素红S染色（一般用于分化晚期鉴定）可看到越来越多的钙离子沉积；6 L1 I0 f, H( |: @" D/ y
（3）同时，不同浓度的FBS也会对其增殖能力有影响，1-10%的FBS，以10%的效果比较好一些； s! n8 |) p. u* M( R
（4）也可加入一定量的EGF诱导其分化，不同尝试的0.1、1、10、100ng/ml EGF，以10ng/ml的EGF效果最好，可协同促进其分化；2 x. `2 y0 Q: T
祝好运！
( h6 @6 h! H" Z0 R6 |# i+ o, q3 _

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:44

回复 katysong 的帖子

非常感谢，对了你们实验室的hMSC是买的吗

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:49

回复细胞海洋的帖子0 ?3 p$ ?% g5 W8 D- W
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我没有hMSC, 用的是国外实验室馈赠的转化的人乳腺上皮细胞，他们转入大T抗原，端粒酶催化亚基和Twist基因，使细胞拥有了干细胞特性，之前用自己配制的诱导培养基（加入地米，Vc和beta甘油磷酸纳）诱导成功过几次，养到最后细胞也都死的严重，所以重新复苏，不过重新复苏的细胞就不行了，诱导第4天左右就开始挂掉了

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:50

回复漂泊的风的帖子. U3 B! y# F, q: P% H& M
# U7 ?/ t5 [$ t% O _
好的，你们用的是哪个公司的？方便告诉一下货号吗？谢谢

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:52

回复 huajie881026 的帖子
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自己没有这个细胞呀，之前用的是一种IPS细胞，刚开始诱导没有问题，但后来复苏后的细胞一诱导就死

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:53

回复飞翔的十字架的帖子" v6 @8 [3 @2 |2 ~# H9 p
& K( I* H! S0 N8 z9 [2 V% M7 R
确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:53

回复飞翔的十字架的帖子9 A. a1 g; u& I3 [5 M

确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

作者: 独孤风云 时间: 2012-8-17 16:53

回复飞翔的十字架的帖子/ s) V% i3 Z8 m

确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

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