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标题: 求助：NSC传代后不长 [打印本页]

作者: ruth891005@yaho 时间: 2012-8-20 10:21 标题: 求助：NSC传代后不长

我养NSC用的是DMEMF12+bFGF20ng/ml＋B27 2ml/100ml，原代长的不错，可是不知道为什么一换液或者传代，细胞就不长了，请问各位大师有没有遇到过这样的情况，是哪个环节出错了，该怎么解决？麻烦众位大师帮帮忙！

作者: xgl200 时间: 2012-8-20 11:06

细胞接种密度和代数的因素要考虑，我养msc少了长的就慢，代数高了也长的慢。

作者: 小渝 时间: 2012-8-21 09:34

我养的一般还加了EGF20ng/ml，可能也要考虑下营养物质是否跟得上，另外就是楼上所说的接种的密度和代数，可能换液的方法也会有一定影响的啵！个人愚见而已！

作者: 生旦净末丑 时间: 2012-8-21 10:25

我们也是加了EGF 可能是培养基的问题，也可能是你消化传代时操作有问题你再仔细想一下，有没有可能哪一步除了问题

作者: wgmzky 时间: 2012-8-21 19:38

首先是EGF得加20ng/ml 还有就是不知道你的NSC是什么年龄的小鼠以及你的换液传代方式原代成球几天传代球长到多大传代还有你之前有没有养出过神经球是贴壁培养还是悬浮成球培养是你之前养出过神经球现在养不出来了还是你根本没有养成果神经球如果这些问题你不说清楚没法轻易给你下结论我也遇到过这种问题

作者: smallbite 时间: 2012-8-21 23:50

neurosphere dissociate的方法可能也有影响，我觉得accutase效果不错

作者: ruth891005@yaho 时间: 2012-8-22 13:40

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我刚开始养，原代长成球了，消化后传代就不长了，我养的是悬浮的，谢谢大师帮忙

作者: ruth891005@yaho 时间: 2012-8-22 13:41

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取的是孕12.5天左右的孕鼠

作者: wgmzky 时间: 2012-8-22 21:03

我做过13.5天的胚鼠做NSC相对来说还是很容易的等到球长到100-150um 的时候离心收集 800rpm 1min就可以然后加1ml 0.05% trypsin 消化1分钟以内 10%FBS 终止消化不加因子培养基洗一下然后1ml tip吹打50次左右就可以种细胞了这种NSC用一般的dish的话应该会有很多贴壁的但是同时会有很多悬浮的球不知道你有没有遇到过这种情况

作者: wgmzky 时间: 2012-8-22 21:04

我做过13.5天的胚鼠做NSC相对来说还是很容易的等到球长到100-150um 的时候离心收集 800rpm 1min就可以然后加1ml 0.05% trypsin 消化1分钟以内 10%FBS 终止消化不加因子培养基洗一下然后1ml tip吹打50次左右就可以种细胞了这种NSC用一般的dish的话应该会有很多贴壁的但是同时会有很多悬浮的球不知道你有没有遇到过这种情况

作者: wgmzky 时间: 2012-8-22 21:06

还有一种情况如果你的球很少传代后细胞密度很低也可能导致死亡但是对于胚鼠来说这种情况应该少见因为胚鼠原代成的球很多

作者: wgmzky 时间: 2012-8-22 21:50

还有一种情况如果你的球很少传代后细胞密度很低也可能导致死亡但是对于胚鼠来说这种情况应该少见因为胚鼠原代成的球很多

作者: ruth891005@yaho 时间: 2012-8-23 11:00

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