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标题: 细胞传代 [打印本页]

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-20 14:54 标题: 细胞传代

请教各位，细胞传代时有两种方法，一种是终止消化结束后离心取细胞沉淀，然后加培养基培养；还有一种是直接终止消化结束后补加培养基培养。这两种方法差别就是有其中有没有消化液。如果不离心，对细胞的生长影响大吗？（因为每次离心太麻烦了）

作者: 也行天下 时间: 2012-8-20 15:22

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我觉得最好还是把消化液去掉，不然肯定会对细胞有影响的。

作者: fenglinzhu 时间: 2012-8-20 15:26

不会影响吧，我个人觉得离心反而会减少细胞数量，甚至伤害细胞。如果考虑到终止消化液的我建议直接刮取啊。

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-20 16:11

回复 fenglinzhu 的帖子9 ]% T4 Z [8 {: ~4 X4 w2 ]7 P- c( w
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请问这句话“如果考虑到终止消化液的我建议直接刮取啊。”是什么意思啊？培养基终止消化后什么刮取啊？

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-20 16:13

回复也行天下的帖子# i4 Z. C) x3 J% _8 U1 [) o
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可是，我买的一种细胞的说明书上，就没有说要离心啊，难道是胰酶浓度低的原因？我的是0.05%。

作者: crystal_xjw 时间: 2012-8-20 16:15

影响倒不会很大，因为消化的过程是用胰蛋白酶，但是你的培养基里有FCS，所以FCS会有所损耗，但是对细胞不会构成威胁，只是培养基中的FCS减少了一些，适当多加一些培养基就可以了，或者多些FCS。

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-20 16:18

回复 crystal_xjw 的帖子; \3 e- F1 B# F5 k: |4 `8 q4 m; C

哦，受教了~Thank you!

作者: 也行天下 时间: 2012-8-20 21:41

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你养的是什么细胞啊？可能细胞不同，消化传代的方法也不同吧！我养的肝癌细胞和iPS细胞传代都是进行离心或自然沉淀后吸弃上清的。

作者: myboluo 时间: 2012-8-20 22:22

这个要具体情况具体分析，大多常用细胞系或成系的肿瘤细胞系传代时可以不用去除消化液，有些细胞对消化液比较敏感，而低俗的离心反而影响不大，这时候就需要去除（大多见于原代组织分离的细胞）。而有些细胞恰恰相反，离心对其伤害更大，那就要尽量避免离心。
自己的细胞要想养好（或者为了偷懒），最好前期多分几瓶，不同条件折磨折磨，摸索下细胞的脾气，比如多长时间换液合适，是否有密度依赖（传一瓶特别稀的看它能不能长起来）或接触抑制（细胞长满后不传代，只换液看细胞会不会大面积死亡）

作者: 也行天下 时间: 2012-8-21 07:46

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学习!

作者: 生旦净末丑 时间: 2012-8-21 09:40

各有各的好处，这还是要看你的细胞类型以及生长状态，如果想更清楚的话就做一次对照，一个采用离心，一个直接加，看哪个方法细胞的细胞量多生长状态好，不就彻底明白了

作者: aulenuyah 时间: 2012-8-21 09:44

可以在消化即将结束的时候，将消化液吸弃，然后加入培养液终止消化，之后吹打均匀用于接种，基本可以避免残余消化的影响

作者: 文文2012 时间: 2012-8-21 09:55

对于楼上的问题，要根据细胞种类灵活掌握
根据本人多年细胞培养经验，对于大多数细胞比如一些成纤维细胞的传代培养，胰蛋白酶消化后不离心，直接加入适量添加血清的完全培养液，混匀，分盘传代培养即可。但需要注意的是胰蛋白酶的添加量尽可能的少，一般以正好覆盖细胞，并能成功消化即可。

作者: fenglinzhu 时间: 2012-8-21 10:10

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用细胞刮铲刮取细胞啊。

作者: fenglinzhu 时间: 2012-8-21 10:16

回复 Dongqin11 的帖子" l1 j( v7 F5 s3 Y6 Y) R# H2 O
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用于人体治疗的细胞都不能用终止消化液的啊，这种情况下一般会选用细胞刮铲刮取吧。

作者: shy8610 时间: 2012-8-21 11:11

看情况，我们实验室的规矩是都是离心后重悬的，楼主的这种情况，我个人提个粗陋的看法：很多新人做了一段时间实验后，开始学会偷懒了，总是想这里省一步，那里省一步，其实是不可取的。就事论事的话，可以省还是不可以省，得自己摸索，如果是普通细胞系，当然无所谓，大不了死了重来，但是如果是珍贵细胞系，死了，是不是很多人会选择撒个谎骗老板，总之，不要随便更换步骤，如果你自己确信自己的做法更优秀，我也支持

作者: aulenuyah 时间: 2012-8-22 09:33

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是的，胰酶的量不能过多

作者: bibottll 时间: 2012-8-23 14:39

我都是终止之后离心

作者: romanyuo 时间: 2012-8-23 15:28

加胰酶后孵育，趁细胞快要还没被完全消化下来的时候，弃掉大部分胰酶，留下几滴就可以把细胞完全消化下来而且加培养基后残留胰酶很少。

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-23 15:30

回复 aulenuyah 的帖子1 ?" s, S0 Q- V- ?2 S+ }

在消化即将结束时吸弃消化液，不会损失很多细胞吗？

作者: avbn 时间: 2012-8-23 15:33

回复 Dongqin11 的帖子* Z- _( F& V6 L! G
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细胞种类不同，耐受条件不一样，最好做一个分组对照，看看哪种条件细胞活率更高，状态更好

作者: aulenuyah 时间: 2012-8-24 08:44

回复 Dongqin11 的帖子9 y, \3 u6 j0 b, P4 |1 D1 Z

这个要看自己的控制了，首先消化液要少一点，刚好覆盖细胞就可以，然后消化时间比正常略微短一点点，操作时轻柔一点，基本上不会损失很多细胞的

作者: ditiger 时间: 2012-8-27 16:20

我们是先加胰酶，然后倒掉，消化完加培养基。

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