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标题: MEF这状态，大家帮忙看看咋回事啊 [打印本页]
作者: 刘森泉    时间: 2012-8-21 11:00     标题: MEF这状态，大家帮忙看看咋回事啊

MEF刚复苏出来的时候好好的，可是一传代就不好了。于是我用刚复苏出来的MEF转病毒，最后还是状态不好，很多细胞都成碎片了，还在的细胞也都是颗粒组成的。 MEF-P1转染后 MEF-PA转染后 MEF传的二代 MEF传的二代

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图片附件: [MEF-PA转染后] liu3_副本.jpg (2012-8-21 10:57, 183.63 KB) / 下载次数 294
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图片附件: [MEF-P1转染后] liu4_副本.jpg (2012-8-21 10:57, 159.36 KB) / 下载次数 269
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作者: sloth    时间: 2012-8-21 11:46

明显是污染了。。从新复苏吧。。而且细胞数量有点少。。。。
作者: 刘森泉    时间: 2012-8-21 12:57

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不是污染噢。
作者: crystal_xjw    时间: 2012-8-21 13:03

是细胞都碎裂了吧，是不是消化过了，或者没有洗掉胰蛋白酶啊，以至于都是细胞碎片，好的细胞不多。
作者: 不倒翁    时间: 2012-8-21 15:06

消化过了吧
作者: 小猪快跑    时间: 2012-8-21 16:20

一个是细胞接种的比较稀疏，二十细胞看着像是受到了什么刺激因素！
作者: 刘森泉    时间: 2012-8-21 18:12

回复 crystal_xjw 的帖子" q% ^) m4 B% T. W0 x* `2 B

8 e! B, t* f/ r( e: l消化一般我都在显微镜下看直到细胞基本都飘起来为止，时间是挺长的。应该要怎么操作？谢谢。
作者: 刘森泉    时间: 2012-8-21 18:12

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消化一般我都在显微镜下看直到细胞基本都飘起来为止，时间是挺长的。应该要怎么操作？谢谢。
作者: crystal_xjw    时间: 2012-8-21 19:32

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% M% U5 @; r( C* j. [. h$ M时间尽可能短一些，一般在手心里孵育，轻轻敲，使加快漂浮，也可减少酶对细胞的损伤。
作者: fenglinzhu    时间: 2012-8-21 19:53

回复 刘森泉 的帖子4 c# A/ _3 |5 u
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好像不要这么长时间吧，有80%左右的细胞飘起来就可以终止消化了，长时间胰酶处理对细胞伤害挺大的。
作者: lazyworm    时间: 2012-8-22 08:19

胰酶消化等细胞变圆就应该终止消化了，胰酶对细胞的损伤是不可逆的。从图片上看细胞状态非常差，不是污染，应该是操作造成的。
作者: 不倒翁    时间: 2012-8-22 15:50

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不用放温箱 直接在显微镜下看着 都缩成一个一个的了 一拍盘就全掉下来了
作者: huangcong1988    时间: 2012-8-27 14:18

经常遇到这样的问题，污染，没法了，只能扔掉，我之前一直这样，传代后或者PBS洗干净以后还是很多，而且越来越多，细胞最后就漂起来了，所以干脆扔掉
作者: 蔚海橙天    时间: 2012-9-6 06:53

1、你的MEF冻存前状态怎么样？冻存前如果就状态不好的话，复苏后会有影响，建议冻存前一天换一次培养基；2、冻存前的MEF是否老化？3、建议传代前进行细胞计数，自己的经验是这种细胞对接种的密度还是有要求的；4、再就是确定你的培养基（pH等）和血清的状况。
作者: safflower    时间: 2012-9-7 13:51

你的这种细胞状态我也遇见过，可能是两个问题：* c) w+ A8 d4 t# W" S, ]
1.细胞消化时间过长，吹打过猛。解决办法：缩短消化时间，一般镜下看到细胞回缩，间隙变大即可终止消化，不要等到细胞飘起，那时已经晚了。吹打时尽量轻柔，不要产生气泡。
6 Z% {! ]3 O% R" p2.如果排除了上述问题，细胞状态仍旧像图片那样，就要考虑支原体污染的问题了，支原体污染一般很难除去 。有一种除支原体污染的药物，名字我忘记了，一般试剂公司有卖的，有点小贵。
作者: 刘森泉    时间: 2012-9-8 08:16

谢谢大家提的意见，非常感谢！
作者: baibai    时间: 2012-9-12 11:05

我们也遇到过MEF这样，不是污染了，主要是传代的时候传得太稀了！细胞是密度依赖性生长，这么稀的话，细胞状态就会很容易变差，长成你现在这个样子，而且看起来还脏脏的~~~
作者: baibai    时间: 2012-9-12 11:05

我们也遇到过MEF这样，不是污染了，主要是传代的时候传得太稀了！细胞是密度依赖性生长，这么稀的话，细胞状态就会很容易变差，长成你现在这个样子，而且看起来还脏脏的~~~
作者: wbj1983    时间: 2012-9-13 11:08

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* @# F+ R5 i% ]0 O2 D9 n4 A" }; D: u6 `" r( ?9 f
依图来看，应该是支原体污染，培养细胞的过程中防止支原体污染很重要，一旦污染只能重新做，所以大家一定注意，所有过程一定规范。
作者: 辛西雅    时间: 2012-9-13 11:40

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加过胰酶后十字交叉轻轻晃匀，放入培养箱温度比室温高，那样消化快一点也不用花太长时间减小细胞损伤几率



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