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标题: 大家说说，都什么情况会染菌呢？ [打印本页]

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-21 18:54 标题: 大家说说，都什么情况会染菌呢？

细胞的培养预防污染是个首要问题，总是会有各种污染，大家说说在什么情况下会污染细胞，污染的是那种菌，都有什么表现，以及如何预防和染菌以后怎么处理比较好。还有紫外会杀灭所有菌吗？酒精会消灭那些菌？0.22微米的滤膜能滤过所有的菌吗？哪些不能虑过呢？

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-8-21 22:05

染菌其实与操作关系不是很大，我以前实验室就经常有不擦酒精、空手做实验也不染菌的，出现的几次染菌一般都是培养基或者是用的东西本身没有灭菌好。细菌处理最简单，如果是孔板，直接把这孔洗掉就行；如果是霉菌，可以用75%乙醇处理2h，然后洗掉，但极有可能再染菌。但如果是摇瓶或是平皿的话，那就认倒霉，直接扔掉吧。% A: d. Q3 g7 G! t/ h% ~0 o
紫外的杀菌，我认为基本没用，只是自我安慰而已，除非长时间（》12h），加上75%的乙醇，才有一定的杀菌效果，实验室的一些材料灭菌就是这种方法，但还是容易染菌，实在没办法而为之，不推荐。而且紫外开的时间太长，对人也不好，大量的臭氧熏得人受不了。我一般也就开个30min意思一下，时间紧的话根本就不开。. v2 n8 @# Q4 o$ g+ T# j
酒精和紫外一样，只是一个预防作用，总比用水擦的好。
0.22 μm可以过掉细菌，但是支原体过不掉，达到一般的除菌要求没问题。

作者: maria622 时间: 2012-8-22 08:18

紫外线穿透力很弱，杀菌力很差的，另外，紫外还有诱变作用，建议不要使用。

作者: wcfeng88 时间: 2012-8-22 08:31

细胞培养过程中常出现的污染是酵母菌和支原体污染，酵母菌污染细胞一般会全军覆没，镜下可以看到椭圆形不停做类似布朗运动的酵母菌，而支原体污染一般镜下看不出，只是感觉细胞形态有变化，细胞生长缓慢。出现酵母菌污染一般都是实验人员无菌操作出问题，而支原体污染常见的就是胎牛血清污染了，滤膜是过滤不掉的，我们一般对血清做个支原体检测实验，阳性的话直接扔掉，或者加入一些抗支原体药物用于一些比较粗放的预实验。

作者: cjsbaicai 时间: 2012-8-22 08:50

紫外杀菌无外乎两种方式，一是直接照射使细菌蛋白/核酸变性，；第二种是产生臭氧，臭氧是一种强氧化剂，通过呼吸作用进入细菌，使其还原性物质被氧化而影响其生理生化。这两种方式都能导致细菌，真菌的死亡。酒精主要是渗透性杀菌，即通过渗透进入细菌，从而使其胞内蛋白变性凝固。

作者: chendongbo338 时间: 2012-8-22 10:05

一般霉菌污染可以用84，硫酸铜或迭氮钠处理，如果孵箱整个污染，需要正常收拾外，还要用84清洗，再用酒精处理，就是闻道有些大，通气后，调整1到2天再用，不然孵箱PH值改变，也会影响细胞污染' G" L0 ^- e! C4 d5 c

作者: chendongbo338 时间: 2012-8-22 10:06

不过一般很难污染，如果污染，还是从自己的操作上找一下原因

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-22 10:08

回复 wcfeng88 的帖子8 y+ t% t" B4 q' T j' j! d

支原体检测实验怎么检测？抗支原体都用什么药？

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-22 10:10

回复 cjsbaicai 的帖子

酒精渗透多长时间达到效果呢？

作者: 小猪快跑 时间: 2012-8-22 10:13

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0.22 μm的虑膜会滤掉真菌吗？菌丝和孢子之类的能吗？

作者: fenglinzhu 时间: 2012-8-22 16:20

我觉得紫外灭菌基本没有作用，以前都是用紫外诱变育种来着，万一紫外了，诱变出不死细菌。。。酒精的话是有一定的灭菌作用的，其灭菌原理主要就是使有机质变性（包括蛋白啊，核酸啊）。0.22μm的虑膜可以去除绝大多数的细菌，真菌比细菌大，应该是没有问题的。但是支原体、病毒等直径比较小的生物就无法去除了。如果钱多的发烧的话可以用孔径更小的无热源滤膜，可以做到无热源，核酸都可以过滤掉。正常操作一般都不容易污染的，只要你不直接用手去接触细胞和试剂就好了。出现污染一般都是试剂、耗材、器械本身染菌了，所以说培养细胞还是都用进口货比较好，靠谱！

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-8-22 19:22

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应该能过，但夏天最容易染的也就是真菌

作者: smallbite 时间: 2012-8-22 23:43

所有的措施都是辅助作用，关键是做实验的人& V: h7 l) N2 d' w' d l+ Z
说的极端一点，所有的污染都是直接接触造成的，也就是你的身体（不光是手，可能是胳膊和其他部位）碰到了不该碰的地方。0 R N% X; ~. J) r
当你能做到时刻都能谨记自己身体的位置，从不无必要或无意识地接触的时候，开不开紫外，用不用酒精，戴不戴手套都不重要了。在空气干净的地方一般的实验不在超净态台里操作污染的机会都不大。

不过有些人永远做不好，对自己身体位置不敏感，和物体产生了接触经常根本不知道。经验丰富的实验员很多不戴手套，因为这样更敏感

作者: redmaple 时间: 2012-8-23 13:40

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7 J& p' s& A- W' I; Q
细菌都能除去，你说真菌能不？

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