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标题: 2i培养出现问题 [打印本页]

作者: zhangliqin 时间: 2012-9-7 09:38 标题: 2i培养出现问题

用2i培养mES时，刚开始细胞复苏起来可以贴壁，且长的还行，但是长到第三天之后，克隆开始大量飘起来，之后传代，细胞就不贴壁了，这是怎么回事呢？

作者: bj123456 时间: 2012-9-7 09:46

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用2i培养基培养就是这样，不含血清，克隆非常容易飘。但是传代之后应该还会贴壁的。

作者: 褚cell 时间: 2012-9-7 10:28

检测下细胞有没有污染

作者: romanyuo 时间: 2012-9-7 11:03

是否是在进行贴壁筛选，浮起来的不是你所需的细胞！就像MSC全髓培养，不用淋巴细胞分离液，培养基进行筛选，贴壁的才是所需细胞。

作者: genedu 时间: 2012-9-10 10:42

按照应启龙最早使用2i培养体系，他认为飘起来的细胞都是干性比较好的细胞，特别是在养大鼠的ES或者iPS细胞时，您就会发现，飘起来的细胞在干性检测或者说后期的基因修饰上，都是占优的，只不过在传代过程中比较麻烦。所以说恭喜楼主，您的细胞不错

作者: zhangliqin 时间: 2012-9-11 10:07

回复 genedu 的帖子9 V5 S) a6 V0 r, h+ D% Y

好像不是这样的，我觉得我的细胞好像在培养过程中死了，不然传代后应该是可以贴壁的，现在还没有找到原因。。。

作者: zhangliqin 时间: 2012-9-11 10:08

回复 bj123456 的帖子$ H1 f/ z- Q0 m% z: u5 ~! n) ]# c% q

所以是不是细胞已经死了才会这样子，现在都还不知道是怎么回事，想再培养一次看看

作者: zhangliqin 时间: 2012-9-11 10:12

回复褚cell 的帖子
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但是在血清培养条件下不会出现这样的问题，所以不应该是细胞污染吧？实验室刚开始养细胞，没有检测污染的试剂盒，请问你们都是用什么KIT检测呢？

作者: genedu 时间: 2012-9-11 11:04

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你的细胞飘起来的时候的时候是单个细胞呢？还是克隆状？如果有图的话，发个过来大家瞧瞧

作者: zhangliqin 时间: 2012-9-11 11:06

回复 genedu 的帖子/ y& c k4 I6 x7 Q# C
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是整个克隆飘起来，上次看到细胞这样子就没有拍了，等过几天拍了在传

作者: 褚cell 时间: 2012-9-11 19:05

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有时候支原体污染短期内不能表现出来，表现出来时候可能已经难以找污染源了，支原体污染有试剂盒，检测成本基本可以从新做细胞了

作者: genedu 时间: 2012-9-11 21:34

回复 zhangliqin 的帖子* Z* [# ~" Y1 K! h7 ?. D( l
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按照我做大鼠ES和iPS的经验，飘起来的克隆真的是不错的克隆，然后把上清吸取，离心，再铺，都能长起来，时间比较长一点，还会飘，仅供参考哈

作者: lindan666666 时间: 2012-11-22 14:40

我们用了2i的培养液也是效果不好，细胞死的很多哦

作者: lindan666666 时间: 2012-11-22 14:45

我们也用了2i培养液，小鼠ES细胞比平时养的惨多了，死得很多哦

作者: huangcong1988 时间: 2012-11-22 15:42

哪2i？CHIR-99021 PD0325901吗？抑制分化的不是？

作者: huangcong1988 时间: 2012-11-22 15:43

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2i培养液跟楼主一样么？CHIR-99021 PD0325901

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