干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
你养的间充质干细胞能传几代？
[打印本页]
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-17 23:18
标题:
你养的间充质干细胞能传几代？
如题，虽然努力控制消化时间，但是细胞还是渐渐老化！所用的培养基均是Gibco的DMEM-LG+10%澳洲FBS+1%双抗。
' k8 c! U! ]- j3 U& X! r4 \
SD-MSCs做了几次，大约在P7左右增殖能力明显减弱，并且细胞变扁变宽。
" _5 M f8 n9 ]' c$ x2 `
我养的hBM-MSCs因为都是骨科来源的，病人年龄都比较大，MSCs基本传至P3、P4就老化了，并且增殖速度明显减慢。
" {4 `7 R" ?, H+ G7 b8 b
UC-MSCs和CB-MSCs也就能传至P5。
/ t$ h4 }( |' n8 a/ @6 u. e( r3 g
虽然看很多文献报道说可以传很多代细胞形态没有明显改变，但是也有文献中给的图片在较早代数就会老化。
2 d k& P+ y( e. l
很想知道各位大侠MSCs所能传到的代数，以及如何减缓细胞的衰老。
6 D$ D; u" _4 @
欢迎交流！
作者:
wangzhiqi86
时间:
2012-9-18 08:52
我的rMSCs能传到十多代，贴壁形态稍微变细了点，但倍增时间没有变，5代以后的分化没做过，不知道其他character发生变化没有
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-18 12:25
回复
wangzhiqi86
的帖子
+ A* h2 @: n0 v" {8 ]$ ]5 w
0 b; \: O+ \; @* L7 Z
十多代，哇 我想都没想过， 是细胞系吗？
1 b4 n& }8 \6 a% Q$ v4 X
还有细胞系是不是能传很多代？
作者:
sdwzg119
时间:
2012-9-18 12:57
一般10代以内形态基本不会发生变化，不过基本上都不传哪么多代，最长的一根脐带传代代接近40代。
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-18 15:41
回复
sdwzg119
的帖子
7 i. L5 u! [! N% }- j: k, u
8 [1 \) i) e3 E& T! C7 I
请问有什么方法让细胞不老化吗？
作者:
sdwzg119
时间:
2012-9-18 15:47
回复
huajie881026
的帖子
& b8 b. V# ?1 Q- x
y/ d7 \- }. A5 ^0 J0 o
需要传代密度需要掌握好，前几代稍微密一些，后面稀一些。
" B2 b0 c4 S8 E t/ M1 N- |
还有，绝对不能等长满了在传，80%就要传代，生长的过密会造成细胞老化，并且是不可逆的老化。
6 r0 D: L3 }1 q
还有，和培养体系有关。
作者:
wangzhiqi86
时间:
2012-9-18 16:20
回复
huajie881026
的帖子
4 U3 X! b% G7 ^$ P
" U# s+ ^! X ^' j3 w. V, ?
不是细胞系，是当时刚刚分离出来后，做的传代实验，大致看了看细胞形态，具体的没有做。
$ P! g: T- W/ b( E K. ^5 `
细胞系理论上可以传几十代吧，比如做药物生产的细胞，最多的都可以传代100代以上。
作者:
wangzhiqi86
时间:
2012-9-18 16:23
回复
sdwzg119
的帖子
" e7 b) k' x. s6 R+ Y7 x) |
, q) E& w0 L0 m
请问你说的不可逆的老化是指所有的细胞，还是一些细胞。还有，这种不可逆具体表现在哪些方面呢？我以前在细胞长到很满后传代，但细胞的倍增时间也没有很大变化啊！谢谢
作者:
pailishi
时间:
2012-9-18 16:30
加点因子才行
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-18 19:37
回复
pailishi
的帖子
7 x9 E/ ]& ~* n+ h S4 g0 J: s
( H! }2 K) X* e% A2 G! ]
是bFGF吗？
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-18 19:38
回复
sdwzg119
的帖子
( _0 E( p# A2 {$ j. d: W
) W3 f( ~/ U5 l. m5 [) Z
嗯 受教了 请问您用的是什么培养体系呢？
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-18 19:48
回复
sdwzg119
的帖子
$ @3 k% }! a, g3 {" h2 L
) b w% w4 r9 ]4 m7 y
请教您脐带是如何分离的？酶消化还是组织块贴壁爬片法？
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-19 09:33
回复
sdwzg119
的帖子
; b0 Y+ S- U' c# ?
9 b0 R8 a5 ?/ K% j
请问您使用的是什么培养体系呢？是DMEM-LG+10%FBS吗？还是无血清培养基？加bFGF了吗？
作者:
liuyul03
时间:
2012-9-19 09:56
传代代数与年龄有关，也有类似的文章。我做同一种动物的，有的8、9代就老化了，有的十几代还问题不大，年龄相似，我想与培养方法也有很大的关系，至于传100代以上，我想那是永生化了吧。本质上，间充质干细胞不是可以无限传下去的细胞，你也不必过虑。
作者:
ditiger
时间:
2012-9-19 12:17
如果只是用普通L-DMEM+FBS的话，是很容易变大变宽，细胞分裂变慢的，因为这种培养基不是干细胞培养基啊~ 用点好一些的培养基吧，好多公司都有卖~
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-19 12:32
回复
ditiger
的帖子
. b) a7 R6 l4 ~/ ~ M& h
& R1 n4 f2 w7 d8 o3 E# G6 t
干细胞培养基很贵啊，而且我养细胞很多，消耗很大的！
作者:
yedanna
时间:
2012-9-19 15:43
我养的是大鼠的骨髓间充质，最高培养到10代（没继续往下），连续培养，没冻存过。8代以后增值能力较弱，细胞变宽的数量增多。第10代的时候过流式，跟前面的2代没区别。分化能力没对比过。文献说大鼠的能传到60代以上，不过没试过。
作者:
biomater
时间:
2012-9-20 09:33
一般是10代以内做实验都没问题的，听说骨髓间质干可以传到20代。。。。可我没做过这么久！！
6 Y- j- J# E2 b, f1 k
自己做骨髓间质干实验的话，最的代数最大的传到7-8代，一般8代以上的都不拿来做了！
1 G" {. Q( e" {7 Z n6 k$ q: k4 v
胚胎干细胞好像没有这个限制，我拿到手的细胞都是10代以上的了，只是帮别人养了一段时间。。。
作者:
firstaider
时间:
2012-9-25 01:05
MSC的传代次数和以下几个因素相关：
+ F+ c1 B7 `7 w+ h$ X+ J
培养基情况、研究员操作水平、细胞来源情况
! S: L- p @/ }$ K
不过一般不会传很多代，公司生产用于临床的干细胞也就在P4到P5，
3 q) {) [ P/ n7 e# j4 c$ `
传代次数太多的话就算表型和形态都不变，其干性也会降低的。
作者:
huajie881026
时间:
2012-9-25 09:30
回复
firstaider
的帖子
/ v$ U6 ?; O2 z: F, T* r/ O
6 T/ x4 f; C# i
谢谢指点！
作者:
星火燎原
时间:
2012-10-7 10:23
回复
huajie881026
的帖子
( d7 [3 |( Y6 K$ ?
6 n' G# B2 T/ _1 v& s- f
不加双抗的话细胞状态会好一点，可以试着不要加
作者:
huajie881026
时间:
2012-10-7 12:25
回复
星火燎原
的帖子
7 G1 \' q) p9 }2 ^4 N8 Y7 p
: d$ s- c7 n- c8 F/ j, v7 t
为何不加双抗细胞状态会好一点，求指教！
作者:
星火燎原
时间:
2012-10-7 16:23
回复
huajie881026
的帖子
8 G' m! }6 @- T! `
, A) v4 g# ]5 d \) ~
加双抗在一定程度上会促使细胞分化
作者:
漂泊的风
时间:
2012-10-7 16:26
基本没问题的。我们传到16代，细胞形态依然很好，估计还是操作的过程中出了问题。
作者:
huajie881026
时间:
2012-10-7 20:25
回复
漂泊的风
的帖子
5 f/ @& q6 N( `. D
( {+ {! {3 M$ H. ?/ U' q9 Y
请教您是如何消化细胞的呢？有什么更重要的细节可以使细胞少受伤害吗？
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5
