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标题: 你养的间充质干细胞能传几代？ [打印本页]

作者: huajie881026 时间: 2012-9-17 23:18 标题: 你养的间充质干细胞能传几代？

如题，虽然努力控制消化时间，但是细胞还是渐渐老化！所用的培养基均是Gibco的DMEM-LG+10%澳洲FBS+1%双抗。& f& G2 Y" u- W: i: J
SD-MSCs做了几次，大约在P7左右增殖能力明显减弱，并且细胞变扁变宽。
我养的hBM-MSCs因为都是骨科来源的，病人年龄都比较大，MSCs基本传至P3、P4就老化了，并且增殖速度明显减慢。4 n" F1 z( L" K+ o
UC-MSCs和CB-MSCs也就能传至P5。8 p) C; B5 {2 f% x- x }" U. C
虽然看很多文献报道说可以传很多代细胞形态没有明显改变，但是也有文献中给的图片在较早代数就会老化。
很想知道各位大侠MSCs所能传到的代数，以及如何减缓细胞的衰老。
欢迎交流！

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-9-18 08:52

我的rMSCs能传到十多代，贴壁形态稍微变细了点，但倍增时间没有变，5代以后的分化没做过，不知道其他character发生变化没有

作者: huajie881026 时间: 2012-9-18 12:25

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6 V! G5 Y. g3 b% [8 [7 {& j2 \
十多代，哇我想都没想过，是细胞系吗？ M- u! Y: B. _% f
还有细胞系是不是能传很多代？

作者: sdwzg119 时间: 2012-9-18 12:57

一般10代以内形态基本不会发生变化，不过基本上都不传哪么多代，最长的一根脐带传代代接近40代。

作者: huajie881026 时间: 2012-9-18 15:41

回复 sdwzg119 的帖子" T8 H( y2 H, Z' N, G# U: Q' t5 e
! Q( E2 e3 Y4 H5 a
请问有什么方法让细胞不老化吗？

作者: sdwzg119 时间: 2012-9-18 15:47

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需要传代密度需要掌握好，前几代稍微密一些，后面稀一些。, U, \2 i9 `; V# s9 _9 K6 ?
还有，绝对不能等长满了在传，80%就要传代，生长的过密会造成细胞老化，并且是不可逆的老化。
还有，和培养体系有关。

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-9-18 16:20

回复 huajie881026 的帖子: L1 p) V" G) D2 o1 f: v

不是细胞系，是当时刚刚分离出来后，做的传代实验，大致看了看细胞形态，具体的没有做。
细胞系理论上可以传几十代吧，比如做药物生产的细胞，最多的都可以传代100代以上。

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-9-18 16:23

回复 sdwzg119 的帖子5 A2 x9 E: _4 e. f. x: P
- ^& n% B4 R" S+ |1 u2 e
请问你说的不可逆的老化是指所有的细胞，还是一些细胞。还有，这种不可逆具体表现在哪些方面呢？我以前在细胞长到很满后传代，但细胞的倍增时间也没有很大变化啊！谢谢

作者: pailishi 时间: 2012-9-18 16:30

加点因子才行

作者: huajie881026 时间: 2012-9-18 19:37

回复 pailishi 的帖子$ H: D/ _2 A U6 J; z/ O

是bFGF吗？

作者: huajie881026 时间: 2012-9-18 19:38

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嗯受教了请问您用的是什么培养体系呢？

作者: huajie881026 时间: 2012-9-18 19:48

回复 sdwzg119 的帖子2 J8 g; g6 c* p$ v2 E! T4 e! p- `
" M. K/ F/ R9 c' U
请教您脐带是如何分离的？酶消化还是组织块贴壁爬片法？

作者: huajie881026 时间: 2012-9-19 09:33

回复 sdwzg119 的帖子

请问您使用的是什么培养体系呢？是DMEM-LG+10%FBS吗？还是无血清培养基？加bFGF了吗？

作者: liuyul03 时间: 2012-9-19 09:56

传代代数与年龄有关，也有类似的文章。我做同一种动物的，有的8、9代就老化了，有的十几代还问题不大，年龄相似，我想与培养方法也有很大的关系，至于传100代以上，我想那是永生化了吧。本质上，间充质干细胞不是可以无限传下去的细胞，你也不必过虑。

作者: ditiger 时间: 2012-9-19 12:17

如果只是用普通L-DMEM+FBS的话，是很容易变大变宽，细胞分裂变慢的，因为这种培养基不是干细胞培养基啊~ 用点好一些的培养基吧，好多公司都有卖~

作者: huajie881026 时间: 2012-9-19 12:32

回复 ditiger 的帖子: W' c0 v9 W; n* [ E

干细胞培养基很贵啊，而且我养细胞很多，消耗很大的！

作者: yedanna 时间: 2012-9-19 15:43

我养的是大鼠的骨髓间充质，最高培养到10代（没继续往下），连续培养，没冻存过。8代以后增值能力较弱，细胞变宽的数量增多。第10代的时候过流式，跟前面的2代没区别。分化能力没对比过。文献说大鼠的能传到60代以上，不过没试过。

作者: biomater 时间: 2012-9-20 09:33

一般是10代以内做实验都没问题的，听说骨髓间质干可以传到20代。。。。可我没做过这么久！！6 P) _5 A$ U" Y; Q' _
自己做骨髓间质干实验的话，最的代数最大的传到7-8代，一般8代以上的都不拿来做了！
胚胎干细胞好像没有这个限制，我拿到手的细胞都是10代以上的了，只是帮别人养了一段时间。。。

作者: firstaider 时间: 2012-9-25 01:05

MSC的传代次数和以下几个因素相关：
培养基情况、研究员操作水平、细胞来源情况. O+ u& m% t# L( x0 @
不过一般不会传很多代，公司生产用于临床的干细胞也就在P4到P5，
传代次数太多的话就算表型和形态都不变，其干性也会降低的。

作者: huajie881026 时间: 2012-9-25 09:30

回复 firstaider 的帖子+ A7 R1 ^* A# G/ e, r4 j4 \
: z b3 h, Z" e6 P7 W
谢谢指点！

作者: 星火燎原 时间: 2012-10-7 10:23

回复 huajie881026 的帖子. c! p; G9 T/ L0 e' ~7 B) {4 G
* T8 O0 t8 i) H) b$ Y. f' Q
不加双抗的话细胞状态会好一点，可以试着不要加

作者: huajie881026 时间: 2012-10-7 12:25

回复星火燎原的帖子2 @# q J5 Q- F/ g% e
, }$ E* Z$ [: m& I7 |! h
为何不加双抗细胞状态会好一点，求指教！

作者: 星火燎原 时间: 2012-10-7 16:23

回复 huajie881026 的帖子3 y$ B! a* a7 n' |( I; Q1 z
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加双抗在一定程度上会促使细胞分化

作者: 漂泊的风 时间: 2012-10-7 16:26

基本没问题的。我们传到16代，细胞形态依然很好，估计还是操作的过程中出了问题。

作者: huajie881026 时间: 2012-10-7 20:25

回复漂泊的风的帖子- b2 `) n( _; G" X
4 h; B6 E4 ~- {
请教您是如何消化细胞的呢？有什么更重要的细节可以使细胞少受伤害吗？

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