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标题: 如何鉴别养的细胞是不是干细胞？ [打印本页]

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-18 09:10 标题: 如何鉴别养的细胞是不是干细胞？

感谢论坛的朋友们一直对我的帮助。
想问一下，如何鉴别自己养的细胞是不是干细胞？除了看一下干细胞阳性标记物是不是阳性外还有哪些方法？怎样多方面证明自己的细胞是干细胞？如何让区分干细胞和肿瘤细胞？谢谢大家！

作者: ind6562 时间: 2012-9-18 09:45

如果你的干细胞（原代）是由比较成熟的方法得到的，鉴定一些阳性标志和阴性标志就行了，比如间充质细胞的“四阴三阳”。
如果你用的是新创的方法，就在以上基础上诱导它的分化吧，能分化就是干细胞。

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-18 09:55

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谢谢！请问诱导分化的方法有哪些？

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-18 09:58

回复 ind6562 的帖子7 }3 @; y" s1 Y/ N% b$ T

我把养得的类似干细胞的集落放到获得干细胞的原始细胞（间质细胞）中，细胞分化成原始细胞（间质细胞）。这是诱导分化了吗？

作者: sdwzg119 时间: 2012-9-18 13:04

干细胞也分好多类别的，一般肯定先简单相应的表型，然后诱导以后再鉴定是否分化成了相应的目的细胞。

以间充质干细胞为例：鉴定了表型以后，在做三系诱导分化，就能证明细胞是间充质干细胞了。

作者: ind6562 时间: 2012-9-18 13:18

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如果能证明这两种是完全不一样的细胞，那就是。% B7 @" B0 \- ~' J* G+ L \
诱导分化的方法很多，要看你希望你的细胞向哪个方向分化，比如加BMP（骨形态蛋白）就可促使一些干细胞向软骨或成骨分化。你把你的干细胞放回收集来源的细胞集落（这不能称原绐细胞，注意）中，或许可以诱导它向原来的细胞分化，是因为这些细胞分泌的一些因子导致的。

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-19 13:29

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真的受益匪浅！谢谢你细致的讲解！

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-19 13:31

回复 ind6562 的帖子% ?3 u! C4 R; q" x0 M
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我也觉得原来的细胞分泌了一些诱导因子，很想检测出来，可以用什么方法呢？在换液的时候我已经把旧的培养液收集起来了。

作者: ind6562 时间: 2012-9-19 13:56

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ELISA应该可以，检测前你要先针对性地预判会有哪些因子，因为要买抗体。

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-19 20:18

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预判挺难，前天把一个胚胎干细胞IM(内细胞团）也放入里面（间质细胞上），IM贴壁，两天后IM 找不到了，之前贴壁的地方转化成间质细胞。我怀疑是间质细胞分泌了某种因子诱导干细胞分化。

作者: ruofan1982 时间: 2012-9-20 10:03

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三系诱导分化，这个能具体些吗？或者提供些参考文献，谢谢

作者: ruofan1982 时间: 2012-9-20 10:04

回复 ind6562 的帖子8 ?0 N" q! J" K e* H6 A
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你把你的干细胞放回收集来源的细胞集落（这不能称原绐细胞，注意）中，或许可以诱导它向原来的细胞分化，是因为这些细胞分泌的一些因子导致的。- j7 ]8 L8 Q1 ~2 X! B" ^$ ]
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这个是什么意思呢？“收集来源的细胞集落”3 _3 H# R* M& Y8 O( D6 L8 u
谢谢

作者: jensn 时间: 2012-9-20 14:53

先看你是哪种干细胞，如果是原代的骨髓间充质干细胞，从形态上看，骨髓间充质干细胞一般成长梭形，或者不规则形且呈旋涡状排列，同时做流式的话，CD分子的表达现在一般遵循“CD34,CD45双阴性，CD44，CD90双阳性的原则，再进一步的做诱导鉴定的话，如果你的细胞能够诱导成成骨，成脂肪等，说明你的细胞就是干细胞了。可以看点相关的文献！

作者: lmh_yixue 时间: 2012-9-21 13:41

回复 jensn 的帖子 Y) |, U8 [0 l: d# o
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谢谢你！我看的文献太少了。是上皮组织的间质细胞。

作者: huangxf1998 时间: 2012-9-29 08:55

干细胞的特性即是你鉴定需要做的。
1.多潜能分化。当然要做诱导实验了。也就是把你养的干细胞通过各种诱导剂去诱导你的细胞形成各种组织细胞，常用的有骨细胞（激素就行）、脂肪细胞、神经细胞等等。
2.表面标记物。CD什么什么的，上面的弟兄都说了，你自己找吧。流式细胞还可以进行分离。
3.克隆性。这个简单，把你的细胞稀释得几乎快没有了（多少倍我忘了，你自己找吧），然后放到培养皿里养，过几天形成克隆。
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有这三个实验就完全可以证明你的细胞是干细胞。我建议大家伙儿应该多看看书。中文的现在已经写得很清楚了，但最好是看英文的文献。这些文献大多发表在2000年前后，因为当时发表文章时，证明干细胞存在就是牛文。所以，对干细胞的描述非常多，而且详细。8 _0 A0 w8 X4 l% v9 z
说句实在话，现在发文章时不需要你提供这么多的数据。你问问你老板吧，他应该懂的。

作者: lmh_yixue 时间: 2012-10-11 15:52

回复 ind6562 的帖子+ F3 K4 U- }; h5 v k) W% v

我们准备对干细胞进行诱导分化了，除了加骨形态蛋白还有哪些？一般用哪个公司的好？

作者: ind6562 时间: 2012-10-13 20:17

回复 lmh_yixue 的帖子$ F4 E9 n' ^8 c& H. [+ p3 v5 {3 A

维甲酸，促进神经分化~~

作者: sun_happone 时间: 2012-10-14 14:17

另外，干细胞因为有很强的增殖潜能，因此它有比一般细胞高得多的核质比，用显微镜可以留意观察下。

作者: Donnies 时间: 2012-10-19 14:35

首先要看你的来源啊，用流式细胞仪的方法检测其表面特异性标志，进行筛选，肿瘤细胞的话，一般养不了多少代，养个10代之后，形态都发生了很大变化了

作者: lousia04306 时间: 2012-10-20 04:10

如果是MSC的话，按国际标准即可!
1.贴壁培养7 b( s, n5 p1 |4 Y9 F* s5 O
2.特定的表面抗原（Ag）标志物
3.多向诱导分化潜能等, \! t/ p" B/ \7 b8 k6 p
首先，当保持在标准培养条件， MSC必须是采用组织培养瓶贴壁培养。此外，这些细胞流式细胞仪检测，必须表达CD105，CD73和CD90，缺乏表达CD45， CD34 ， CD14的或细胞CD11b， CD79a或CD19和HLA-II类。第三，细胞必须能够分化成骨细胞，脂肪细胞和软骨细胞在体外分化条件下标准。3 M6 @/ X8 ?" m1 s

作者: mansnoopy 时间: 2012-10-20 10:52

想检测是不是干细胞，首先从形态学上来辨认，你要对你养的干细胞应该是什么样的形态要很了解，然后再用生化marker去检测，包括阳性和阴性。当然最直接的就是诱导分化。

作者: ditiger 时间: 2012-10-20 11:03

一般是干细胞标记物，分化来确定。

作者: lmh_yixue 时间: 2012-10-23 10:22

回复 lousia04306 的帖子$ n$ w; @' H. c" w6 E5 L3 y

谢谢谢谢

作者: lmh_yixue 时间: 2012-10-23 11:21

回复 sun_happone 的帖子* i! [# e a- k& C+ @
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是的，我们培养的细胞核质比很高的。

作者: Donnies 时间: 2012-11-9 09:26

首先看你的细胞是从哪里取得的，比如说你想取一种细胞，在某个部位比较多，那么你就可以从那个部位取，这样得到是你想要的细胞会比较多，然后需要用流式进行筛选，至于肿瘤细胞，它本身就是通过原代细胞进行培养到二十代之后筛选出来的，再根据肿瘤细胞的表面标志进行鉴定，你所取得的细胞有没有什么蛋白特异性的表达，这个方面也可以进行检测一下

作者: labghost 时间: 2012-11-14 15:29

回复 lmh_yixue 的帖子8 O! q! Z+ \. X. {
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你可以用spr或者seldi前后对比试试。然后坚定蛋白结构，得到结构后对比蛋白数据库，如果存在，名字不用你想，如果不存在，那么，这个蛋白质就是你的了。

作者: deshenglll 时间: 2012-11-22 15:38

流式，诱导分化

作者: lmh_yixue 时间: 2012-11-22 16:57

回复 labghost 的帖子3 C% ~; n3 m8 p+ ~
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你好，可否进一步交流

作者: ag2017 时间: 2013-1-7 15:24

看你样的是什么来源的细胞了？可以诱导培养例如脂肪干细胞可以成骨诱导使用磷酸酶染色鉴定

作者: wf78365421 时间: 2013-4-22 13:36

看你是想鉴定是什么干细胞？胚胎干细胞？神经干细胞？间充质干细胞？/ P/ @' L; V: B+ W( A" A
不同的细胞有不同的比较公认的鉴定方式，可以查文献。
拿间充质干细胞来说，一般通过以下三种方式综合鉴定：
1、生物学特性：比如贴壁生长、细胞形态、细胞周期
2、表面标记物（流式表面抗体）：阳性如CD29 CD90 CD105等等，阴性如：CD34、CD45、CD14等3 |& K, V8 I h- ?. Y% R3 N
3、诱导分化：间充质干细胞成脂肪诱导分化、成骨诱导分化、成软骨诱导分化

作者: 250286645 时间: 2013-4-23 09:42

ind6562 发表于 2012-9-18 09:45 / Y& `6 e8 u$ f6 d1 h) X7 ]" c
如果你的干细胞（原代）是由比较成熟的方法得到的，鉴定一些阳性标志和阴性标志就行了，比如间充质细胞的“ ...

) P* N1 s- X: y0 U4 n4 o1 g) b
请问穿四阴三阳是指？

作者: tzq521 时间: 2013-4-24 08:04

用流式细胞仪检测怎么样

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