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标题: 干细胞冻存疑问 [打印本页]

作者: cjsbaicai 时间: 2012-9-19 09:10 标题: 干细胞冻存疑问

脐带间充质干细胞冻存时，冻存液如何配置

作者: zhujiang007 时间: 2012-9-19 09:19

用血清重悬细胞，逐滴加入8%-10%的DMSO，分装到冻存管，放入梯度降温盒中。

作者: xiaolizhang87 时间: 2012-9-19 09:20

回复 cjsbaicai 的帖子. _* z# W4 H! z; L0 V

90%FBS+10%DMSO，用之前放冰上或4度冰箱冷却至少30min。效果还不错。。

作者: cjsbaicai 时间: 2012-9-19 09:25

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如果是用于人的疾病治疗的话，冻存液还可以含有DMSO吗

作者: jihaijie 时间: 2012-9-19 10:12

细胞冻存就是常规操作吧血清+10%DMSO 然后程序降温

作者: zhujiang007 时间: 2012-9-19 12:08

DMSO分很多级别，选择临床级的。而且在复苏换液后将其除去，不会有影响的。

作者: joesiezhao 时间: 2012-9-19 12:33

现在临床操作已经不去除DMSO了，而是用药来缓解DMSO毒性及带来的伤害。

作者: FYH 时间: 2012-9-23 14:19

本帖最后由 FYH 于 2012-9-23 14:33 编辑 - ?& E/ ?3 o! v

可以加点ROCK inhibitor,这样干细胞复苏活得多

作者: firstaider 时间: 2012-9-27 22:46

冻存液首先关键在于冷冻保护剂，一般常用DMSO此类渗透性保护剂，一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份的DMSO混合而成，现配现用或配置后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存，使用前于室温水浴融化。关键在于DMSO的终浓度为10％，对于普通细胞来说，小牛血清浓度似乎高点越好，但没有这个必要，用细胞培养液即可。

作者: lindanmiaoyao 时间: 2013-5-17 11:38

我之前看到一篇文献上说，DMSO除了有毒副作用，还有促进向神经细胞，内皮细胞等分化的作用

作者: zfgxb 时间: 2013-6-1 08:35

我将培养中的脂肪干细胞放4°C冰箱保存一周，没加什么冻存液，昨天拿出来观察染色，细胞没死，也没分化，跟之前的一样。细胞只是代谢减慢，省却不停的换液。

作者: elvis.yao 时间: 2013-6-4 10:36

细胞冻存复苏后，一般洗细胞的过程是洗去DMSO还是血清，或者是其他的冻存液成分？

作者: 细胞海洋 时间: 2013-6-5 09:50

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作者: 凤城收藏 时间: 2013-6-5 10:57

lindanmiaoyao 发表于 2013-5-17 11:38 ; J! b3 C0 T, P% Q+ c8 n
我之前看到一篇文献上说，DMSO除了有毒副作用，还有促进向神经细胞，内皮细胞等分化的作用

其实间充质干细胞冻存液中DMSO浓度相对于脐血来说是小巫见大巫，一份脐血通常使用量在4~5mL左右，移植时可以不清洗，直接回输，因为洗完DMSO后细胞成团厉害，即使这样的患者，移植后也很少见副作用报道，因为DMSO可以通过呼吸排出。愚见。

作者: wf78365421 时间: 2013-6-5 15:24

回复 zfgxb 的帖子, F4 L3 m( S. I
' ^8 c' F u( _+ v/ D
你是染色看活率？2 Y. _9 g% I9 P
那你有没有重新接种？看脂肪干细胞是否可以重新生长？

作者: wf78365421 时间: 2013-6-5 15:25

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是的。脐血移植都是连DMSO一起回输到人体。只要量不大，就没有问题。

作者: wf78365421 时间: 2013-6-5 15:26

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洗去DMSO。因为常温下，DMSO对细胞有毒性。

作者: elvis.yao 时间: 2013-6-5 17:40

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感谢您的回答，但是如果冻存液复苏后，盐水稀释直接后直接使用呢？＜10%DMSO毒性很小吧？

作者: elvis.yao 时间: 2013-6-5 17:43

回复 wf78365421 的帖子* M6 ~9 f, ]: z- u/ V$ g- M

那为什么目前很多公司生产的细胞都是在实验室洗去DMSO，然后4℃在8小时内运输？如果直接冻存状态运输然后复苏直接使用不是更方便？

作者: wf78365421 时间: 2013-6-6 14:29

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1 \0 z8 l1 a; n
可以冻存状态下运输（干冰或者液氮），然后复苏直接使用。
除去DMSO可以减少副反应。

作者: wf78365421 时间: 2013-6-6 14:31

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这要看你冻存液的成分。如果冻存液的成分为临床可以使用的成分（白蛋白+HES+DMSO），而其中DMSO含量很少，就可以复苏后直接使用。
如果你用生长培养基+DMSO冻存，因为培养基不是临床级别，所以不能直接给人体使用、

作者: 蓝O海 时间: 2013-6-6 15:03

我想dmso复苏后培养几代应该会去掉吧，我们冻存也是8%dmso，20%血清，72%的培养基。我们以前也不加培养基，后来发现加培养基活率会更好。

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