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标题: 干细胞冻存疑问 [打印本页]
作者: cjsbaicai    时间: 2012-9-19 09:10     标题: 干细胞冻存疑问

脐带间充质干细胞冻存时，冻存液如何配置
作者: zhujiang007    时间: 2012-9-19 09:19

用血清重悬细胞，逐滴加入8%-10%的DMSO，分装到冻存管，放入梯度降温盒中。
作者: xiaolizhang87    时间: 2012-9-19 09:20

回复 cjsbaicai 的帖子4 z8 c+ A% W9 s& E7 }- W
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90%FBS+10%DMSO，用之前放冰上或4度冰箱冷却至少30min。效果还不错。。
作者: cjsbaicai    时间: 2012-9-19 09:25

回复 xiaolizhang87 的帖子0 j( n% R( f* W" L7 U

/ r  M- b4 s' {* P如果是用于人的疾病治疗的话，冻存液还可以含有DMSO吗
作者: jihaijie    时间: 2012-9-19 10:12

细胞冻存就是常规操作吧 血清+10%DMSO 然后程序降温
作者: zhujiang007    时间: 2012-9-19 12:08

DMSO分很多级别，选择临床级的。而且在复苏换液后将其除去，不会有影响的。
作者: joesiezhao    时间: 2012-9-19 12:33

现在临床操作已经不去除DMSO了，而是用药来缓解DMSO毒性及带来的伤害。
作者: FYH    时间: 2012-9-23 14:19

本帖最后由 FYH 于 2012-9-23 14:33 编辑
6 Z) z5 m" [2 c$ P$ [; ~+ M  I9 S% @+ I7 E; ^
可以加点ROCK  inhibitor,这样干细胞复苏活得多
作者: firstaider    时间: 2012-9-27 22:46

冻存液首先关键在于冷冻保护剂，一般常用DMSO此类渗透性保护剂，一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份的DMSO混合而成，现配现用或配置后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存，使用前于室温水浴融化。关键在于DMSO的终浓度为10％，对于普通细胞来说，小牛血清浓度似乎高点越好，但没有这个必要，用细胞培养液即可。
作者: lindanmiaoyao    时间: 2013-5-17 11:38

我之前看到一篇文献上说，DMSO除了有毒副作用，还有促进向神经细胞，内皮细胞等分化的作用
作者: zfgxb    时间: 2013-6-1 08:35

我将培养中的脂肪干细胞放4°C冰箱保存一周，没加什么冻存液，昨天拿出来观察染色，细胞没死，也没分化，跟之前的一样。细胞只是代谢减慢，省却不停的换液。
作者: elvis.yao    时间: 2013-6-4 10:36

细胞冻存复苏后，一般洗细胞的过程是洗去DMSO还是血清，或者是其他的冻存液成分？
作者: 细胞海洋    时间: 2013-6-5 09:50

回复 elvis.yao 的帖子
5 U/ \- R7 u! A/ V0 @5 O) M7 O
4 U2 Y  b9 G* i# b" |0 W5 {建议你发新帖提问
作者: 凤城收藏    时间: 2013-6-5 10:57

lindanmiaoyao 发表于 2013-5-17 11:38 4 T! Z# a5 A1 q7 w
我之前看到一篇文献上说，DMSO除了有毒副作用，还有促进向神经细胞，内皮细胞等分化的作用
4 k; Z* i3 E; G; i0 W5 Y2 x
其实间充质干细胞冻存液中DMSO浓度相对于脐血来说是小巫见大巫，一份脐血通常使用量在4~5mL左右，移植时可以不清洗，直接回输，因为洗完DMSO后细胞成团厉害，即使这样的患者，移植后也很少见副作用报道，因为DMSO可以通过呼吸排出。愚见。
作者: wf78365421    时间: 2013-6-5 15:24

回复 zfgxb 的帖子9 |( `  v; O" N7 G, I1 m- Q

1 L2 ]1 c& A4 Z4 h7 M4 }你是染色看活率？
; V/ k: S. E  y& b那你有没有重新接种？看脂肪干细胞是否可以重新生长？
作者: wf78365421    时间: 2013-6-5 15:25

回复 凤城收藏 的帖子
* {: j+ r& n2 e( V5 x8 W3 l' d* t2 U) U) O' `6 a0 I/ z
是的。脐血移植都是连DMSO一起回输到人体。只要量不大，就没有问题。
作者: wf78365421    时间: 2013-6-5 15:26

回复 elvis.yao 的帖子
1 v1 {+ R, i# H1 n* p' j& J0 H
, G1 g/ S+ f$ n, e3 M% ^. T& V洗去DMSO。因为常温下，DMSO对细胞有毒性。
作者: elvis.yao    时间: 2013-6-5 17:40

回复 wf78365421 的帖子
' Z* W9 n2 B' w( n& }* d, W2 b: `. h1 ^- m$ R& a
感谢您的回答，但是如果冻存液复苏后，盐水稀释直接后直接使用呢？＜10%DMSO毒性很小吧？
作者: elvis.yao    时间: 2013-6-5 17:43

回复 wf78365421 的帖子
0 z4 x4 X7 y; M' G- r- t
) J* n  u- O8 X' I那为什么目前很多公司生产的细胞都是在实验室洗去DMSO，然后4℃在8小时内运输？如果直接冻存状态运输然后复苏直接使用不是更方便？
作者: wf78365421    时间: 2013-6-6 14:29

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) z+ Z7 q0 Y; t: v/ A/ Z可以冻存状态下运输（干冰或者液氮），然后复苏直接使用。
0 o% v$ Z- t* D7 }- q* t除去DMSO可以减少副反应。
作者: wf78365421    时间: 2013-6-6 14:31

回复 elvis.yao 的帖子- y/ t  W; Z, f
4 H5 P/ z0 ^+ o- I! h* C
这要看你冻存液的成分。如果冻存液的成分为临床可以使用的成分（白蛋白+HES+DMSO），而其中DMSO含量很少，就可以复苏后直接使用。% ?8 w' H6 \( q$ B( x# j/ ?
如果你用生长培养基+DMSO冻存，因为培养基不是临床级别，所以不能直接给人体使用、
作者: 蓝O海    时间: 2013-6-6 15:03

我想dmso复苏后培养几代应该会去掉吧，我们冻存也是8%dmso，20%血清，72%的培养基。我们以前也不加培养基，后来发现加培养基活率会更好。



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