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标题: 质粒260：280 1.64怎么提纯呢？ [打印本页]

作者: willing 时间: 2012-9-22 12:12 标题: 质粒260：280 1.64怎么提纯呢？

方法简单一点。

作者: 寒山拾得 时间: 2012-9-22 12:48

本帖最后由寒山拾得于 2012-9-22 12:49 编辑
+ M8 }3 E6 C/ c! D9 m
苯酚，氯仿抽提一下。; ~( \% Q' C, c; z% _1 G; C
或者用PCR产物回收的过程过一下柱子。3 R4 e8 |. h2 M1 t8 B

作者: huangxf1998 时间: 2012-9-29 08:33

有专门的试剂盒，从CHAGEN买。
如果想省钱，那会很麻烦，分子克隆书上专门介绍了提取质粒的方法，很复杂，简单说一下，我做过一次，成功，而且量比试剂盒大多了，就是费事：
1.扩增就不说了，因为你没问。' t4 K8 D# o) d1 `2 C
2.苯酚，氯仿抽提所有的DNA，
3.将有质粒的所有DNA混合物放入CsCl、EB的溶液中混匀，
4.高速离心机离心过夜（可能一般实验室都没有这么高速的离心机）# Q9 n- h% D, f' [" _
5.取分层的（EB)层（粉红色的）。. H- M$ d1 X* {9 i0 E0 A- d1 P
6.然后就比较简单了，按照提DNA的方法提就可以。
- G) S8 ~* k. S) f' \" l: i
基本原理：4 h+ {6 a$ U. l$ y
1.高速离心的目的就是把不同分子量的DNA分层次离出来。
2.氯化铯使离心分层得以实现。
3.环状质粒分子量较小，停留在EB的区域，很容易鉴别。7 P+ l) D- j( v/ K- w
# P" }) _; Y; i# Y1 W. P5 ?/ p% S
比较复杂吧，兄弟，还是买试剂盒吧！有做大提的，有做小提的。我建议你买个小提的，虽然还是很贵，但是方便多了，过一下柱子而已。半天搞定！你老板会同意的。

作者: willing 时间: 2012-9-30 10:57

回复 huangxf1998 的帖子# |& B- f9 z4 x" N+ ?% Q9 h5 n

我有质粒小提的试剂盒，你说的就是这个试剂盒吗？

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