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标题: 哪位大侠分过小鼠成体成纤维细胞？ [打印本页]

作者: echowdk 时间: 2012-9-23 08:34 标题: 哪位大侠分过小鼠成体成纤维细胞？

如题，哪位大侠分过小鼠成体成纤维细胞，能不能把protocol分享一下。& I; L1 f* Y9 n9 o. ]+ p
最近想要做一批。提前谢过。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2012-9-23 21:30

1．取材9 h1 c- ?+ h+ [, e' u) `3 E
取取剃毛后的耳缘组织，置于盛放PBS（加双倍双抗）15ml或者50ml的离心管中。
2．材料处理 6 P# S1 @4 U# Y8 E. ~8 E; [
（1）耳缘组织带回实验室后用加有双倍双抗的PBS冲洗后的置于3.5cm培养皿中，用手术刀去除皮毛和骨。& }# M" |# M# r+ m+ H3 F9 s
（2）在盛有DPBS的平皿中，用镊子将耳缘组织上残余的毛拔掉，反复清洗，直至DPBS中无任何杂质为止。
（3）将耳缘组织放入一小皿中，尽量将其剪碎，呈糊状，加入少量培养液。6 B/ U' W: u+ f) N/ u) _* l9 I9 e
3．细胞培养6 z4 H0 E* O1 j/ K3 E/ r
（1）收集组织块转移至15ml离心管中，离心1000rpm，3min。! i" [, F z) g1 c. k2 y; H
（2）弃去上清，以培养基重悬组织块，转移至T25培养瓶中，尽量将组织块均匀分布，同时小心吸去组织块周围的培养基。$ s8 g9 ^7 O+ ?2 H- o
（3）倒置培养瓶37℃过夜培养，次日翻转，加入1.5ml培养基。
（4）隔日换液，约4日可见组织块周围有细胞爬出

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