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标题: 成软骨诱导阿利新蓝染色 [打印本页]
作者: huajie881026    时间: 2012-10-9 09:25     标题: 成软骨诱导阿利新蓝染色

本帖最后由 huajie881026 于 2012-10-9 09:28 编辑
& W8 ]- S. q7 ]4 W5 w; }. o$ h8 J# ]  e1 h/ W8 e" A5 d6 H5 M
前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：' F2 P( d, F& r- F9 t  o
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
- L; }# {" ~" L- {7 w# u2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
4 a3 a8 A5 R2 w& m, G. x4 I100×1 q% \) |, Y0 m2 v* j2 l
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) h3 @3 Q4 X; [' o9 Q. w200×' F% }0 w: M& t/ j, `/ l
[attach]46495[/attach]
作者: tjbone    时间: 2012-10-9 10:39

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
. T+ Y7 Z: k8 M. B! g7 o! Z软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。
作者: huajie881026    时间: 2012-10-9 14:43

回复 tjbone 的帖子
: u9 u# ~, N, `5 u5 G/ {
+ g) Q! D% \% X3 W* V2 U8 u+ J请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。
作者: tjbone    时间: 2012-10-9 15:12

本帖最后由 tjbone 于 2012-10-9 15:13 编辑
0 X4 ~5 z4 U& s5 F, L6 y7 H
* @# e6 \( C5 K  I- d一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！
作者: huajie881026    时间: 2012-10-11 23:43

回复 tjbone 的帖子
8 ~/ W. t% j& Q' h1 B4 O& G4 }) L3 Y: K- a1 j# A! u% |2 W
嗯  受教了。。。非常感谢！
作者: tutufei    时间: 2012-11-9 18:51

回复 huajie881026 的帖子- d7 u  |7 y5 U5 \, c2 D/ W

' Z8 c! H/ }6 q5 P, J$ ?请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多
作者: huajie881026    时间: 2012-11-11 10:51

回复 tutufei 的帖子
& S+ @. g3 Q7 _6 M4 r, \* c- K3 J5 ?; c! Y. ~9 d& e# g
可能细胞状态不好导致团块长得慢& ^4 L0 w7 Y' k9 h
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片
作者: tutufei    时间: 2012-11-14 22:30

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？
作者: 644414915    时间: 2012-12-6 16:11

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？
作者: 细胞海洋    时间: 2012-12-7 11:01

你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样. T9 f0 z$ F* P* t5 z9 u7 |0 z

3 A8 w1 W  O& P, M4 T4 i1 w- a否则他会看不到% M# X6 _7 Y& S- t8 J
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-12 00:00

请问楼主您做的软骨诱导是pellet培养方式吗？
作者: huajie881026    时间: 2012-12-12 10:36

回复 ytumuyangren 的帖子
+ t% I5 a6 t: _6 m# p  A1 {0 f" W- R7 ?) `* Y1 k& s! T5 I8 y
是的
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-12 20:24

回复 huajie881026 的帖子
  Z9 w6 Y5 T8 k* U
; d8 d% o; v, v6 ^8 h, i能具体讲解一下您是怎么做的吗？我现在也做这方面的实验，但是在pellet培养三天后，形成的球状就崩解了。不知道您有没有这样的情况出现。
作者: huajie881026    时间: 2012-12-13 00:34

回复 ytumuyangren 的帖子6 B5 K, X) \+ \
! X2 D0 o; r) W7 J* w
细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-14 23:06

回复 huajie881026 的帖子
# N7 C+ `+ e1 t# s; g
$ T( Q. @& l5 J5 c# n/ U细胞状态挺好的，我用的是P3代MSC，细胞量是2X105，1200rpm，5min，0.5ml体系。
作者: huajie881026    时间: 2012-12-15 00:45

回复 ytumuyangren 的帖子5 Z$ Z$ M6 O( X& R
* k: O% a# B/ z: O/ |' p
嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet
# I) j! N' \% C) M. q) |你要不再试试
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-15 22:47

回复 huajie881026 的帖子) q; g) O, x6 D! n
! J5 |5 K5 r8 h
我已经做了快一个月了，每次都是前一天刚做好的pellet，第二天pellet上部有球状物，再过两天，球状物就崩解了，在往后就看到离心管底部一直是片状物，pellet没有浮起来的迹象，我再试试吧，不过还是要谢谢你！
作者: huajie881026    时间: 2012-12-16 00:28

回复 ytumuyangren 的帖子
6 G4 U. f4 m  K9 |' w% j
6 d, S  _: A) i. x一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧$ B4 I% p" @1 T
PS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-16 21:36

回复 huajie881026 的帖子
. U# \0 ^' j8 s  [  K+ t
7 g1 f. |# Q1 q- `# I$ {好的，谢谢你，我再试试，有问题再请教你！
作者: tutufei    时间: 2013-1-5 21:35

回复 huajie881026 的帖子
' F/ y$ p8 t- X; B% y' I5 t2 A2 G. l" T) t: w+ |
请问你用的阿利辛兰如何配的？pH?
作者: 644414915    时间: 2013-1-9 02:56

回复 细胞海洋 的帖子( z7 K* i9 P: A" F  ~
: g  t: y$ U. I8 Q! ~3 `& }
谢谢哈，开始没找到
作者: 农夫山泉nn    时间: 2014-12-28 12:03

回复 tutufei 的帖子+ ~. g+ J; d* u# w& @! N1 w0 h
$ Z$ O0 @$ \8 H  c9 k% b, Z, K# s
你好，时间有点久了不知道你还能看到这则消息不了，我软骨诱导的细胞也好小，不知道你最后怎么包埋切片的？最终染上色没有呢？
作者: winstonsee    时间: 2017-6-6 08:54

软骨求一般看不到长吧，或者变小，我诱导得到的软骨球都很小；石蜡切片不顺利的话可以试试冰冻切片
作者: 屋檐上的乌鸦    时间: 2019-3-12 10:41

学习了。



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