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标题: 小鼠IpS传代 [打印本页]

作者: 2006sw0657 时间: 2012-10-9 22:51 标题: 小鼠IpS传代

P1代的小鼠IPS细胞用机械法传代还是酶消化法传代？文献上更多的介绍酶消化法是不是当克隆较多时选择酶消化法而克隆较少时选择机械法传代？请高人指点

作者: 小禾禾 时间: 2012-10-10 09:29

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你所说的p1是指的哪一代？是刚刚诱导你就算第一代，还是已经传过代了？; k' G, i5 V3 \% \8 F d

作者: 2006sw0657 时间: 2012-10-10 10:30

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你好是已经机械法挑取传代的的P1代克隆还请指教

作者: 小禾禾 时间: 2012-10-10 14:18

回复 2006sw0657 的帖子# |5 a* u; d0 P8 a6 X# L" u
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那要根据克隆状态和克隆数量。如果细胞状态不是很好那还是机械的比较好。细胞数量较少的话最好也采取机械的方法，因为酶消化对细胞损伤还是挺大的。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-10-10 15:00

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首先非常感谢你另外想请教你酶消化时会把基质细胞消化下来吗？具体消化过程能告诉我一下好吗？非常感谢

作者: 小禾禾 时间: 2012-10-10 15:16

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消化肯定会把基质消化下来，但没关系，他基本没有存活的能力。很简单就是加酶消化2-3min，然后用培养液终止，吹打，收集，离心，接种。$ z% v* d7 ?( \

作者: 2006sw0657 时间: 2012-10-10 16:39

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嗯好的谢谢你我先试着传代有什么问题再向你请教最后感谢

作者: 小禾禾 时间: 2012-10-10 17:03

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不客气，相互学习嘛

作者: Jonathan 时间: 2012-10-11 13:46

鼠的ips，一般克隆挑出来后，可以用酶消化，然后passage。如果克隆少，就在24well或者12well的一个well里面就可以

作者: 2006sw0657 时间: 2012-10-17 13:42

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你好我的小鼠iPS细胞在24孔板里面克隆长到70-80%贴壁传代至6孔板时最好按多少比例传代？我最近把一个孔分到六孔板的两个孔里面发现细胞长得很慢大部分克隆界限不明显是用胰酶消化分化缘故还是传代太密了？

作者: 第一心音 时间: 2012-10-17 18:38

我不是高人，随便说几句，克隆的问题，文献上说是要酶消化法，但是你要看你自己的克隆情况。个人经验，多数克隆是不需要消化的。不过挑克隆就要看个人的技术了。你先做吧，不懂的再讨论，大家互相学习，师姐愿意跟大家交流

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