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标题: 求助：牛与绵羊克隆过程中的融合问题 [打印本页]

作者: hlwwd1987 时间: 2012-10-11 22:40 标题: 求助：牛与绵羊克隆过程中的融合问题

本帖最后由 hlwwd1987 于 2012-10-11 22:40 编辑
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本人接触克隆时间不长，动物体细胞克隆过程中，卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作，这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。
经过本人多次实验操作练习，我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来，能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%，约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡，剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合（即使相互接触的很好）。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的，在这里想问问各位老师我的融合率低的原因，我的实验的具体参数如下：) S1 v* c* k& m" v* k0 b& K$ X
融合仪：BTX9 u2 E7 y( t7 \/ |
融合参数：1.2kv/cm 30μs/次  连续2次脉冲
融合液成份：甘露醇       0.27mM
                     CaCl2       0.1mM0 ?; I7 d9 f# ?6 T9 m4 n
                     MgCl2       0.1mM  G/ I: ~5 h. D" d" u( x+ X
                     Hepes       0.5mM
                     PVA          0.01%3 |+ S7 X+ y: y

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