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标题: 96孔板的种板与收获细胞数 [打印本页]

作者: ind6562 时间: 2012-10-12 12:04 标题: 96孔板的种板与收获细胞数

如题，不知大家种96孔板和收获时每孔种细胞数是多少？请把细胞数、细胞类型和依据都说一下。, `4 W u/ N7 T! M% @
我做的是间充质干细胞，种板的密度10000和20000/孔都试过，但由于孔很小在显微镜下不好观察，也不知道它们长到80-90%大概是个什么样子以及大概有多少细胞（因为我要在细胞长至80-90%汇合度时检测相关指标）。

作者: 86964109 时间: 2012-10-15 09:06

本帖最后由细胞海洋于 2012-10-15 09:25 编辑 % g. o2 h% W( M$ H

总结下各种孔板细胞接种量仅供参考

细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约）
& A% n* I: [3 l. I1 P
96孔板    4~5X10 4       35mm培养皿          1X10 6

48 孔板    1.3X10 5          60mm培养皿       2.6X10 68 S. p8 F1 ]" d4 B- k
24孔板    2.5X10 5          100mm培养皿          7X10 6/ M+ E! F- {. G4 ^
12孔板       5X 10 5             150mm培养皿       1.8X10 7$ D+ v3 d, w) i9 `% z
  6孔板       1.2X10 6

细胞瓶面积       容量       工作体积       细胞数目612.5cm2       25ml                2ml          5X10 5' E2 s3 ^* ?- D% l" y
25cm2          50ml                5ml          1X10 68

35cm2          75ml             10ml          2X10  6. M/ O- @+ E( T& @

75 cm2          250ml             15ml          4X 10  6, x& k) K' I( w% R2 K
) M8 V8 H5 l9 D  o. a  n9 _
150cm2          700ml             40ml       1.1X107
# }0 U% \4 O$ A8 X* l' ^. Y# @
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。7 n6 n" W. T' j3 s
! b0 f) m; g1 W& s) F/ a: w
, m' I) F5 o. [6 i

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作者: jihaijie 时间: 2012-10-15 09:51

关键看你测定什么指标，一般接种5000-10000就行，然后根据生长特点，融合70%处理细胞，能满足测定要求。

作者: flydayzhu 时间: 2012-10-15 10:13

低氧环境会有什么影响？？

作者: jihaijie 时间: 2012-10-16 10:07

这个看文献，有的是缺氧，低氧和高氧。对细胞的刺激是不同的。

作者: Donnies 时间: 2012-11-1 10:46

首先要看你做的是什么实验，细胞生长速度如何，如果细胞生长很快，你需要两三天之后再做实验，铺板时候的细胞量就需要少一些，而且铺96孔板你需要严格计数，这样你可以控制一下实验的进度，如果细胞长的慢的话，可以多一些，如果你铺1万个细胞的话其实是很多的，我之前做MTT一般也就五六千个细胞，96孔板的底表面积是0.3cm2，而你一般传代用的是直径10cm的大皿，底表面积为60cm2，你可以根据这个计算一下

作者: prophe 时间: 2012-11-1 12:49

CCK-8实验，一般接种3000-5000个细胞，细胞为10T1/2细胞。

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