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标题: 求高人指点慢病毒浓缩和保存的问题 [打印本页]

作者: 第一心音 时间: 2012-10-12 21:32 标题: 求高人指点慢病毒浓缩和保存的问题

我在做IPS，也是用经典的四因子做感染，但是不知道该怎么收集病毒液，感染是一次感染好还是两次感染好，四因子一起感染好还是分开多次感染好，病毒是怎么浓缩的，听说超速离心机可以浓缩，但是不知道怎么操作，转速多少，时间多少，需要买什么器械吗？还有，病毒保存的问题，如果-80保存可以用多久，我是新手，求高人指点，感激不尽。

作者: 匿名 时间: 2012-11-22 19:20

您好，请问你是做人的ips,还是小鼠的ips，我前段时间向别人要了ips细胞做心肌细胞分化，做不出来，打算自己诱导一下；能不能送我一套诱导的质粒，谢谢！我这边是浙江宁波的。

作者: FYH 时间: 2012-12-2 10:22

我是做人的Ips,根据我的经验，病毒液收集（48H，72H）后，病毒浓缩柱子，可以浓缩20倍，足够用于ips 的诱导，如果病毒包的好，直接感染也行， 2-4轮都行。

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-2 14:14

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哪里订购这种浓缩柱呢？价格呢？我也是想浓缩一下病毒，想问一下您转染的话，转293T效率多高？用lip2000

作者: goodboy 时间: 2012-12-3 08:29

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我们用的是millipore的，价格应该不菲，我不是很确定，使用之前需要辐照灭菌。; l" G- z# }2 B7 t3 D1 X
至于转染的话，你如果小剂量包装的话用lipo2000应该没有问题，如果包装的多的话建议用CAPO4转染，具体的protocol网上有。祝你成功

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-3 15:58

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辐照就是紫外照是吧？密理博的，我看过，貌似6000多，你们浓缩都用那个？

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-3 20:03

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是millipore的15ml 100KD吗？这个貌似是浓缩蛋白的吧？做蛋白那一块的吧？

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-3 20:04

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是millipore的 15ml 100KD吗？这个柱子吗？

作者: goodboy 时间: 2012-12-5 09:37

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我看了一下，是这个柱子哈。所以浓缩后高速离心的时候我们加20%蔗糖以去除蛋白。还有辐照不是紫外照射呢。

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-5 10:48

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不是紫外，那用什么照呢？浓缩以后还要高速离心？这是为什么呢？

作者: goodboy 时间: 2012-12-5 14:19

回复 huangcong1988 的帖子0 ^) g; R$ r& z+ H: W. c$ @5 `8 r

具体的我们也不清楚，只知道拿去那家公司辐照，几天后再拿回来，貌似是gamma射线呢（不确定）。至于为什么要高速离心，因millipore的15ml离心管你能收集到的病毒原液很多，应该至少3-4ml.我们如果用来打动物的时候这么大体积的病毒量会带来很多麻烦，如果你做细胞的话没有问题，可以不用高速离心。再说了，超速离心后蛋白还是很多的，因此我们添加有20%蔗糖除蛋白，25000rpm离心2小时后过夜溶解病毒第二天分装并测定滴度

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-6 10:09

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非常感谢，我用来感染细胞的，那么就是说4000g离心20min以后就可以直接用于感染细胞了吗？

作者: huangcong1988 时间: 2012-12-6 10:10

回复 goodboy 的帖子4 b7 V7 L( o# x5 [" X
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不辐照呢？辐照是消毒吗？还是杀菌呢？把外面用酒精棉擦拭干净不行吗？

作者: goodboy 时间: 2012-12-6 14:44

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这个我不太清楚哈，如果直接感染细胞的话可以用了，我们实验室有这样做的，效果也不错。

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