干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 交流一下浓缩病毒的方法 [打印本页]

作者: 第一心音 时间: 2012-10-13 16:00 标题: 交流一下浓缩病毒的方法

最近在做病毒，做IPS的经典四因子，但是病毒是现做现用的，有没有什么方法直接大量获得之后保存起来啊。谢谢

作者: sangwj 时间: 2012-10-15 09:05

我用millipore 100kDa 离心超滤管（UFC910096）浓缩病毒，浓缩后病毒-80保存。

作者: 第一心音 时间: 2012-10-15 11:16

回复 sangwj 的帖子6 W8 v7 Y4 _" G s$ D
+ }0 s7 B: z7 _, a4 z
是要买那种millipore100kDa离心管吗？离心机转速和时间是多少呢，谢谢。

作者: Dongqin11 时间: 2012-10-15 11:34

可是你浓缩之前不要纯化一下吗？在你包装出病毒以后，裂解细胞提病毒并且纯化之后，再用100kd的浓缩管浓缩。

作者: 第一心音 时间: 2012-10-15 11:40

回复 Dongqin11 的帖子" T, x7 ]2 c4 S% h9 k+ ~9 W3 U2 z& {0 `0 P

说的什么？不懂哎

作者: huangcong1988 时间: 2012-10-15 13:53

回复第一心音的帖子, \& y. P4 ~ x1 n( W' V3 U0 n

做哪个物种的ips？用什么方法包毒

作者: Dongqin11 时间: 2012-10-15 14:22

回复第一心音的帖子, X- ^/ M$ h1 l" ~0 k# g0 }& l
! v6 t$ c: x" \4 h, T8 \
你不是用细胞包病毒的吗？

作者: scottist 时间: 2012-10-15 14:39

转速为5000转/分，时间15min左右，具体时间根据剩余液体的量决定。

作者: 荣荣荣 时间: 2012-10-16 13:22

我看有的人直接将含有病毒的培养基冻于-80或液氮，不知道可不可以？

作者: 第一心音 时间: 2012-10-16 15:25

回复 Dongqin11 的帖子1 O% g- I! b/ u

是啊，具体怎么包

作者: 第一心音 时间: 2012-10-16 15:26

回复 scottist 的帖子
% B" W4 x P1 V+ F2 [3 z
多少g呢，15分钟够吗？一定要上面说的那种管吗？谢谢

作者: Dongqin11 时间: 2012-10-16 19:12

回复第一心音的帖子
# H% @2 Z8 a. t7 z4 j
这个，最常用的是多质粒共转染的方法。简而言之就是将一个含有transgene的质粒，一个含有病毒外壳及病毒合成所必须的基因的质粒或者还有含辅助基因的质粒一起共转染宿主细胞中。模拟病毒的包装，最终合成出含你所需要的transgene得病毒。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)