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标题: 细胞培养液中、培养瓶底部出现的小黑点是什么神物啊？多选哦 [打印本页]

作者: yuhaoze 时间: 2012-10-18 19:08 标题: 细胞培养液中、培养瓶底部出现的小黑点是什么神物啊？多选哦

最近养细胞，不管换液的时候怎么洗，第二天在培养液中都会出现小点点的杂质，另外养293T的时候，传代后细胞液很脏。不管是在咱们网站还是丁香园等等的，看到大家对这个东西讨论甚多，有黑胶虫论的，有支原体论的，也有碎片论的，从参与度可以得知，很多很多人深深地被这个问题困扰着，但这个到底是什么一直没有一个公认的答案。5 [. l" a! M/ \' ^" Y6 B* {
大家参与投票吧，选项肯定不全，大家对这个问题还有什么解释，就在下面留言吧

作者: mansnoopy 时间: 2012-10-20 10:53

应该是细胞碎片，你要用percol分一下。

作者: xulijunji 时间: 2012-10-20 20:23

就是黑胶虫啊

作者: 刘森泉 时间: 2012-10-22 18:00

而且会动，但又不是污染。很奇特。

作者: liuyul03 时间: 2012-10-23 16:12

如果是血清当中的，那把培养皿中放上培养液，然后放在培养箱中过几天，看看有没有。我是没见过，反而培养细胞的时候出现了。个人认为是细胞代谢物。

作者: zhanglei1414 时间: 2012-10-23 23:05

任何大的细胞碎片或者较大的蛋白颗粒在培养基中都会做自由运动，叫个啥现象，忘了2 `8 d- V. o" A" W- z
因为显微镜焦距的原因，眼睛看见的就是黑点# a- W5 y6 E: @( Q) E- f
而且还会自己摆动+ w+ f& A1 P$ |6 m0 ^5 r
想看污染没有很容易，一看颜色非常黄，污染了。二看非常浑浊，污染了。三镜检。四做细菌真菌支原体培养。

作者: 坏蛋蛋阿布 时间: 2012-10-24 12:33

你想说：布朗运动？
我培养是在细胞大量死亡的时候会看到小黑点，如果是细胞量很少就看到小黑点的话就不知道是什么了……

作者: yanjie11678 时间: 2012-10-25 17:04

回复 yuhaoze 的帖子. c6 X/ c; m$ f. P2 A5 W9 ?

我认为是支原体污染，短期实验对细胞影响不大，如果是长期实验如iPS 诱导，影响很大。如果细胞比较珍贵可以加杀支原体的药，推荐用Lonza 的，普通的细胞直接扔掉好了。

作者: yuhaoze 时间: 2012-10-25 18:21

回复 yanjie11678 的帖子

好的谢谢！

作者: 86964109 时间: 2012-10-29 09:15

我们用PCR检测，感觉有支原体污染的可能，但不是绝对

作者: hjd8886 时间: 2012-10-29 11:45

师姐说是细胞碎片，因为不透光，所以是黑色的！

作者: xuehu20 时间: 2012-11-6 17:11

回复 zhanglei1414 的帖子 v9 I! ~' y0 {# j$ [' y9 t: A
( v/ _5 ?( C! t2 Q8 H$ Z
你说的是布朗运动吗？

作者: zhanglei1414 时间: 2012-11-6 22:10

回复 xuehu20 的帖子# _, x* h3 v G+ X
# T( ]+ c' `' t9 h
是的，就是布朗运动，血小板在培养基里也是不停的在做晃动，像虫子一样，哪有什么黑胶虫啊，那些东西除了污染就是碎片

作者: labghost 时间: 2012-11-14 15:33

回复 zhanglei1414 的帖子

哥，布朗运动。

作者: labghost 时间: 2012-11-14 15:35

算了吧，有钱直接去搞电镜，再找个寄生虫或者病理的高手一看，就知道这消化不良的玩意儿到底是什么了。

作者: mhqh 时间: 2012-11-15 22:46

去看看透射电镜吧，应该不贵吧，不过我不确定这样制样怎么制，细胞制样的话，要加固定液然后切片的，你可以取那黑色的东西滴到电镜铜网上制两个样，其中一个加固定液……还有，制样的时候，如果不加固定液然后切片，记得滴了之后把铜网上的液滴吸掉……8 I- N0 M% ]8 _
另外，听师兄说，癌细胞在体外反而比正常细胞容易死，死了之后现象包括会出现黑点什么的脏东西，会不会楼主的细胞死了？: m3 q7 m9 i, h2 u. |
新人，不太专业，以上仅供参考，见笑了……

作者: Donnies 时间: 2012-11-27 09:33

国外称其为黑胶虫，国内一般称其为支原体，但是我有看到一篇详细介绍说，实际上支原体很小，在普通显微镜下根本看不到，但是不太可能是细胞碎片，细胞碎片的话传代会消失的，而且那个黑色的东西会越来越多，一直到细胞挂了，应该是支原体吧，长的比较快，至于国外叫做黑胶虫，我觉得都一样，没必要一定要弄清它到底是什么，做实验的时候注意无菌操作，就可以尽量避免这种微生物的存在。

作者: 1101536053 时间: 2012-12-8 15:12

今年估计公布不了，没有几天了

作者: zhu-fu 时间: 2014-4-8 10:40

如果是黑胶虫污染的话，很多情况下都是假的胎牛血清惹得祸，最近做实验遇到这样的问题，才发现是GIBCO胎牛血清的问题

作者: 922922922 时间: 2014-4-8 12:07

回复 yuhaoze 的帖子
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我们的经验是如果这些黑色的小点，随着细胞的生长不断增多，而且细胞也逐渐死亡漂浮，那么很有可能就是黑胶虫了。但是有时，换液后这些黑色小点就明显减少，而且不再增加，应该就是细胞碎片的布朗运动了。

作者: lic126 时间: 2014-4-8 15:31

个人不觉得是支原体。。。因为我们一般细胞的培养液会送相关检验，CTUU，也就是支原体衣原体，至少现在没出现过阳性结果。但像这种小黑体现象却偶有发现，个人感觉还是血清批次的差异或者细胞碎片。。。但一般不影响前几代细胞的生长，之后往后传，没具体针对着实践过。

作者: Latina 时间: 2014-4-18 10:14

我也遇到过这种情况，问老师说没事，但是我很担心，因为是筛选稳定细胞系的过程中，不然得重头再来。里面的黑点看着有时候还在动，我于是每天拿PBS洗2-3次，洗了大约一周后就好很多了，后来就没有了。

作者: l19rna 时间: 2014-6-15 22:21

我无血清培养基养的human ES也出现小黑虫啊！细胞又比较宝贵，怎么去除比较好啊

作者: jojo1988509 时间: 2014-6-16 12:38

会动就是黑胶虫啦！

作者: 922922922 时间: 2014-6-21 10:49

回复 yuhaoze 的帖子
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是黑胶虫的可能性很大。我记得有一种试剂，可以专门去除黑胶虫，而且一旦处理后就再也不会生长。

作者: baicaikua 时间: 2015-5-26 17:36

我始终认为是消化的时候损伤到细胞，应该是细胞碎片和凋亡的细胞，特征是污染物比细胞小，且形状不规则，静止时不会移动，偶尔有大片是碎片聚集的情况。- t6 U% q4 c2 }( _# L# x! }/ \, N- H, \
换液后无法清除干净，但会减少很多，但继续培养又会增多。 q. Z4 ]& U! z# ]7 u
黑胶虫一般是比较小的，形状有一定规则，且会移动。& E: b0 G" s* y9 `
支原体的话一般是细胞生长缓慢，但是培养液里没这么多脏东西。。。

作者: yuanyecat 时间: 2015-5-26 18:02

小黑点可能是黑膠蟲啊，你用高倍顯微鏡看看啊

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