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标题: 神经球怎么贴壁？？？ [打印本页]

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-24 14:53 标题: 神经球怎么贴壁？？？

我想做神经干的免疫荧光，请问哪位仁兄知道怎么让神经球贴壁啊？？我用fn和多聚赖氨酸都试了，结果都没贴上，好恼火哦，请高手指点一二

作者: Tim 时间: 2012-10-24 15:09

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同样的问题！我昨天发过贴了！

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-24 15:16

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那你用大家说的方法有效果吗？

作者: Tim 时间: 2012-10-24 15:21

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我想再等等看细胞能爬上去吗！如果不行我把细胞消化了如他们所说再处理一遍！原理挺好的感觉！我的细胞来源不好！所以我得谨慎！

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-24 18:28

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我感觉那个方法不可靠，仅仅靠加入细胞的方式感觉不行，那样即使贴上了也不牢，最后做的时候还是会被洗掉的，你QQ好多，我加你，我们做的挺像可以交流一下

作者: jj2570782 时间: 2012-10-25 11:23

用10ug/ml 的Laminin包被玻片4h，神经干细胞半小时内贴壁，而且很牢！

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-25 19:29

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请问你用的什么牌子的？？大概多少钱呢？

作者: Tim 时间: 2012-10-25 20:22

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做什么抗体你打算* z3 ~- X. d4 N+ j+ G- W0 \! u

作者: jojomayer 时间: 2012-10-26 03:27

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请问需要多少量？比如一张玻片用几毫升10μg/ml的Laminin(超纯水溶液还是无菌PBS溶液？)？
我看到Sigma公司的推荐是1-2μg/cm2

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-26 11:19

回复 Tim 的帖子5 V. _, e8 I6 f7 W, j; y/ s

我想做nestin，GFAP，NSE等，这个跟做什么抗体有关系吗？不懂

作者: 小渝 时间: 2012-10-30 15:42

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这些就是你要做免疫荧光所需的一抗呀，我也做了神经干的免疫荧光，然后就是用多聚赖氨酸包被，然后爬片，我是贴24h，不消化，直接收集可传代的细胞，虽然24h后可能有些神经球已经贴壁散开分化，但是还有很多是完整的，而且贴的很好。

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-10-30 20:21

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是啊，一抗有问题吗？我也用多聚赖氨酸包被的，结果没贴好，不知道是不是多聚赖氨酸不行哦

作者: 小渝 时间: 2012-10-31 09:41

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5 i- |& \3 j' o4 T* y
多聚赖氨酸工作液放久了效果会降低的啵！

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-11-4 14:14

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感觉我那个也没得好久啊？不会吧！谢谢哈

作者: 小渝 时间: 2012-11-4 17:32

回复 dxldeyou_2006 的帖子" U0 X# ?& G2 W+ d/ R
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短时间我没有试过，就怕贴不牢嘛，所以时间久点了，相互交流哈，可能我的方法也有问题的，嘿嘿。。。。

作者: Tim 时间: 2012-11-4 17:48

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玻片处理了吗！??我的细胞用多聚懒氨酸包被的贴的很好！！9 I0 k; Q2 t4 F, F" d
建议刚刚接种到玻片上后，直接放培养箱隔个2H左右再补加培养基！

作者: 小渝 时间: 2012-11-4 19:28

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谢谢您的建议，我回头试下。我也包被，然后滴神经球在玻片上，我是贴壁了马上就固定的，所以没在补加培养基，因为在滴之前我就已经配好的培养液了，就是球密度比较大那样！我自己也没有试过贴壁几小时后看效果的，嘿嘿嘿。。。。。

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-11-15 10:30

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你好请问你用的laminin是什么牌子的？大概多少钱？效果真的很好吗？我用赖氨酸包被的不行，很愁人

作者: jj2570782 时间: 2012-11-16 00:30

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在图上~

作者: dxldeyou_2006 时间: 2012-11-16 19:33

回复 jj2570782 的帖子
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谢谢哈

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