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标题:
overlap PCR引物设计
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作者:
wangsandan0503
时间:
2012-11-4 16:21
标题:
overlap PCR引物设计
需要在cmv启动子后面做个融合蛋白：
1 }% q3 ?- n$ W% j1 I
前面的基因为：atggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatccgctggaagatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtggacatcacttacgctgagtacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgggcatttcgcagcctaccgtggtgttcgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaagctcccaatcatccaaaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtgccagagtccttcgatagggacaagacaattgcactgatcatgaactcctctggatctactggtctgcctaaaggtgtcgctctgcctcatagaactgcctgcgtgagattctcgcatgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcacggttttggaatgtttactacactcggatatttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttctgaggagccttcaggattacaagattcaaagtgcgctgctggtgccaaccctattctccttcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctggtggcgctcccctctctaaggaagtcggggaagcggttgccaagaggttccatctgccaggtatcaggcaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagggggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcaaagaggcgaactgtgtgtgagaggtcctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattctggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatcgttgaccgcctgaagtctctgattaagtacaaaggctatcaggtggctcccgctgaattggaatccatcttgctccaacaccccaacatcttcgacgcaggtgtcgcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgccgttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggaggagttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaagatcgccgtgtaa
: ~9 \( Z- [0 Z. P* _8 f; v( K
后面的基因为：
7 ?5 A- p# t5 {, W! Y+ R- i# p2 j
atgga aatatacact tcggataact actccgaaga agtagggtct
! |) x- k/ Q" i3 @! R
121 ggagactatg actccaacaa ggaaccctgc ttccgggatg aaaacgaaaa cttcaacagg
1 q" n% y& M4 b
181 atcttcctgc ccaccatcta ttttatcatc ttcttgactg gcatagtggg caatgggttg
) |9 \3 x5 }: d! b' H3 j/ ^
241 gtaatcctgg tcatgggtta ccagaagaag ctgaggagca tgacagacaa gtaccggctg
; P7 f% j) `; g
301 cacctgtccg tggctgacct cctctttgtc atcacactcc ccttctgggc agtggacgcc
: E& K. `4 ]6 @, Y. q
361 atggctgact ggtactttgg gaaattttta tgtaaggctg tgcatatcat ctacaccgtc
! n2 t" m* Q6 h6 g9 L0 ]: t6 a
421 aacctttaca gcagtgttct catcctggcc ttcatcagcc tggaccgcta ccttgccatt
* U7 H3 }, }/ `5 g! k1 k
481 gtccacgcca ccaacagcca gaggccgagg aagctgctgg ctgaaaaggc cgtctatgtg
6 H3 Q+ p6 f: S% y
541 ggtgtctgga tccccgccct cctcctgact atccctgaca tcatcttcgc cgatgtcagc
8 x# Y6 Q! b4 @9 `. _7 Z4 o
601 cagggggacg gcaggtacat ctgtgaccgc ctttaccccg acagcctgtg gatggtggtg
$ `2 c" O! `9 \( F
661 ttccagttcc agcacatcat ggtgggtctc atcctgccgg gcatcgtcat cctgtcctgt
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721 tactgcatca tcatctccaa gctgtcacac tccaagggcc accagaagcg caaggccctc
/ `2 L/ c5 ?0 A
781 aagactacgg tcatccttat cctggctttc tttgcctgct ggctaccgta ttacgtgggg
* \+ s! r: R8 z
841 atcagcatcg attccttcat ccttttggag gtcatcaagc aaggatgtga gttcgagagc
$ s/ t% E/ I0 M
901 gtcgtgcaca agtggatctc catcacggag gccctcgcct tcttccactg ttgcctgaac
; n+ e3 c8 p! k
961 cccatcctct acgccttcct cggggccaaa ttcaagagct ccgcgcagca tgcactcaat
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1021 tccatgagca gaggctccag cctcaagatc ctttccaaag ggaaacgggg tggacactct
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1081 tccgtctcca cagagtcaga atcctcaagt tttcactcca gctaa
5 t# |6 |; S5 h/ ~! |7 `1 @
如何设计overlap PCR引物，帮忙设计一下，谢谢。
作者:
86964109
时间:
2012-11-5 08:56
设计2对引物，A基因上游和B基因下游正常设计，A基因下游和B基因上游引物分别设计30bp左右，A下游3‘端15bp与A基因末尾15bp一致，5’端15bp与B基因起始15bp互补，B上游引物同理，使扩增后的A基因3‘与B基因5’能够有15bp以上互补配对，分别扩增A，B基因，如果产物特异性好可不回收，按照等分子数混合，先进行一次退火，使AB基因融合，补加A上游和B下游引物，继续扩增融合基因。不知我有没有说明白
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