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标题: DC培养中出现的问题 [打印本页]

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-11-6 10:32 标题: DC培养中出现的问题

分离后首先贴壁2h 用含1%血清的DMEM 有时候贴壁数量很多有时候很少，而且会有死细胞和细胞碎片。贴壁数量多的时候隔天观察就会出现死细胞和细胞碎片，做了好多次都是这样子，都要郁闷死了。不知道大家做的都怎么样，有没有遇见过类似的情况或者大家都是怎么养的才会有好的结果？请大家不吝赐教

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-11-9 14:51

难道就没有遇到类似问题的亲吗？

作者: wagumaxida 时间: 2012-11-12 11:18

回复莫邪小仙的帖子( L( H5 t& A1 B8 E

你试试贴壁的时候别加血请

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-11-13 08:50

回复 wagumaxida 的帖子
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请教一下，血清里不是有促贴壁因子吗？一直想不明白为什么促进贴壁要不加血清或者加低浓度的血清呢？

作者: 452359357 时间: 2012-11-13 12:58

建议贴壁后3-3.5h后再加培养液

作者: cheeray 时间: 2012-12-6 14:08

生理盐水清洗三遍之后就没有多少碎片和死细胞了吧。是不是你的单核细胞来源不好？我们都是贴壁半小时就很多细胞贴壁了。。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-12-7 10:30

回复 cheeray 的帖子
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贴壁的时候状态是好的，贴壁后就发现有时候贴的多有时候贴的少。而且隔天就发现有碎片和死细胞。。。请问你们在分离单核细胞的时候裂解红细胞了吗？

作者: wjp130 时间: 2012-12-7 15:01

回复莫邪小仙的帖子. u* t; A9 B- ]+ U; O
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细胞分离的时候不要加裂解液，直接贴壁分离，贴壁俩小时足够了，DMEM里面不加血浆，理论和实践是有区别的，2小时后，弃去上清，用生理盐水洗三遍，洗的时候轻轻晃动，洗完加培养基，DC还是很好养的，& `5 D" U2 K7 [! O: g

作者: cheeray 时间: 2012-12-10 10:53

贴壁时不加血清，细胞清洗三次，梯度离心。。我半小时就贴的很多了。。

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