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标题: 请教CIK细胞培养的最适温度及CO2浓度 [打印本页]

作者: zhuzhentulip 时间: 2012-11-7 20:32 标题: 请教CIK细胞培养的最适温度及CO2浓度

我们刚开始做CIK细胞的培养，CO2浓度设定的是5％，温度37度。新装的co2培养箱未做auto-start CO2浓度的校正，现在已经培养了四瓶CIK细胞了，才发现CO2浓度不准，叫来工程师，检察CO2浓度浓度超过10％了，要重新做auto-start，但需要16-24小时，已经培养的四瓶CIK细胞就没地方放了怎么办？

作者: zhuzhentulip 时间: 2012-11-7 20:43

我现在打算这样做，先将CO2浓度设定为0.1％，这样可以在实际10％的基础上下降（5％-0.1％=4.9％）4.9％，现在实际的CO2浓度就为10％-4.9％=5.1％，接近要求的5％。然后将已经培养的四瓶CIK细胞拿到别的好的co2培养箱中培养，然后在进行auto-start 校正CO2的浓度，等16-24小时auto-start CO2浓度校正完成后在把那四瓶CIK细胞那回来继续培养。你们觉得怎样

作者: zhanglei1414 时间: 2012-11-7 22:02

晕，你一开门一关门，二氧化碳浓度就下去了，既然设定是5%，实际是10%，那你就把门打开，散尽里面的二氧化碳，然后设定到2.5%，里面就是5%了

作者: ljs 时间: 2012-11-8 00:09

楼上的意见，个人不太赞同啊。理由是
1.不知楼主的实验室条件如何，开门不担心污染么？/ V" Z6 I4 e+ g/ n
2.设置到2.5%，真实的浓度就是5%么？
我的建议是，既然楼主能测出气体浓度不准，说明你可以测CO2浓度。我认为安全的方法是：通过开门放气及充气，手动调节浓度到5%，然后关闭培养箱的门和CO2的开关。4瓶的细胞一夜是不会消耗多少的CO2的。而且培养液中的缓冲离子可以保护培养液的PH值稳定。个人意见，仅供参考。

作者: zhuzhentulip 时间: 2012-11-8 21:42

回复 ljs 的帖子7 t) d4 l+ s) J. v

完全赞同，不过我们是这样做的，把4瓶细胞的瓶盖拧紧后做auto-start CO2浓度的校正，第二天auto-start 就完成了，在把CO2浓度设定为5％。就像你说的“4瓶的细胞一夜是不会消耗多少的CO2的。而且培养液中的缓冲离子可以保护培养液的PH值稳定。”只是细胞不生长或生长缓慢了。谢了。

作者: zhanglei1414 时间: 2012-11-8 21:43

回复 ljs 的帖子$ U/ @7 L/ M; B3 L/ V" T3 G. P

我打开培养箱的门，摆放一下细胞，时间稍微长一点，再关上门，门上显示的CO2浓度基本就降到0了，气体交换的速度非常快，不用打开很长时间专门放气，我把一个培养箱的细胞处理一遍，开开关关十几次，污染个细胞就那么容易啊？如果无菌操作熟练的人，不是故意污染，想非故意污染一次也不是那么容易！6 ], x+ M0 u; A' r

目前都是在寻找暂时的处理方法，楼主测的也不是准确的CO2浓度，大概调整一下把浓度降下来就行了，如果正规程序，应该是先转移细胞，再矫正培养箱的CO2浓度，然后转移回来！

个人意见，仅供参开！

作者: zhuzhentulip 时间: 2012-11-8 21:45

回复 zhanglei1414 的帖子7 }" j( b* m K: w( S% }/ |: C

我当时也想过过段时间就把没打开一下，这样CO2浓度就回降下来。但晚上怎么办哦，如果不把auto-start CO2浓度的校正了，开关门不是长久的办法啊。

作者: zhuzhentulip 时间: 2012-11-8 21:54

回复 zhanglei1414 的帖子

当时我打开门后CO2的浓度是-3.3％，关上门后CO2的浓度要过很久才开始从-3.3％上升，说明0点还在-3.3％以下，是把我郁闷惨了，正规程序，的确应该是先转移细胞，再矫正培养箱的CO2浓度，然后转移回来！谢谢了

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