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标题: DC和CIK的混合培养 [打印本页]

作者: wjp130 时间: 2012-11-13 22:23 标题: DC和CIK的混合培养

预实验脐血100ML，养CIK一袋，同时养了几瓶DC，CIK是培养袋养的，到11天的时候取10mlCIK加到DC培养瓶里，细胞数量的比例大概是1:5吧，前三天发现CIK增值很快，远远大于培养袋里的CIK增殖速度（培养袋的CIK状态不好），混合后第五天，发现混合培养瓶有絮状物，第六天做流式，CD3+CD56+ 63%，但没有发现DC。单CIK培养的为CD3+CD56+ 13%，混合培养只能养三天吗？还是有什么其他问题，请教各位老师了

作者: wjp130 时间: 2012-11-17 23:44

没有人回答吗？自己顶顶

作者: sanmao85 时间: 2012-11-19 08:42

期待高手出现

作者: drxia 时间: 2012-11-20 01:31

混合培养后大量增殖的是CIK细胞，DC本身就不多；如果要确定的话，用流式细胞仪检测DC细胞表面HLA—DR、
CDIa、CDl4的表达。( d, b# F$ b( k2 l* O3 W- q
混合培养7天，DCIK细胞增殖数量达到最佳。

作者: wjp130 时间: 2012-11-20 11:53

但是我混合培养后，每天补充白介素2，全量补充，为什么在4--5天会出现絮状物呢？是怎么回事啊，请教了$ d% ]0 Q7 y. R: M# R

作者: drxia 时间: 2012-11-21 00:57

出现絮状物可能有两种情况：一是增殖的细胞团；二是可能有真菌感染，可以做真菌培养检测排除。

作者: jiguojie87 时间: 2012-11-21 08:58

DC-CIK最好是在CIK培养七八天的时候再跟DC混合培养，混合培养之后最佳状态应该在5-10天，具体时间因标本的不同而异。

作者: 细胞海洋 时间: 2012-11-21 09:23

回复 wjp130 的帖子2 H' G7 Z4 }5 t
! R3 p |$ _ K8 c* [- z! V
你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样9 Z0 S% X$ i: H% H, k- @! {9 s% i
- d5 F( `/ y2 @2 K' O4 p
否则他会看不到

作者: wjp130 时间: 2012-11-25 22:17

回复 drxia 的帖子7 d; K" Z& ]+ o0 h
2 O( p8 U) f6 g4 Z+ f! n; e4 G! t; l
不可能是污染的，我做培养6年了，污染还是可以鉴别出来的，也不是细胞团，因为吹打不开，显微镜下观察，像是死细胞粘附在一起了，

作者: wjp130 时间: 2012-11-25 22:21

这几天用脐血又培养了一袋CIK，用的培养袋，第9天时候，培养基体积为1700ml，细胞计数：7的9次方，CD3和CD56双阳为90%，不可能这么高吧，是标本的个体差异？？还是流式检测的问题？

作者: wjp130 时间: 2012-11-27 16:03

回复 drxia 的帖子6 p7 {; ]7 k* ]! N
7 [! d$ H+ T' h
你好，你们培养CIK和DC流式表达最高能达到多少，我想做个对比，谢谢。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-11-27 16:12

回复 wjp130 的帖子4 O0 @* k4 S: L

我们培养时也会有出现絮状物的情况，应该是死细胞，DNA蛋白析出然后粘连一些死细胞就成团了所以吹也吹不开。没用培养袋养过，不知道袋子和瓶子的区别，不过单养的CIK双阳性有点低。。。

作者: wjp130 时间: 2012-11-27 23:15

回复莫邪小仙的帖子% H. }4 C: Q# b4 ~2 c; u
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最近混合培养了一次DC加CIK，双阳高达99%不知道流式出了什么问题，哎

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-11-28 12:49

回复 wjp130 的帖子8 S' l/ S, c7 H4 c+ A
D5 w. E# _# F, N4 M g* L
别急，慢慢找原因。。。遇到解决不了的问题总是很烦躁

作者: stang198651 时间: 2012-11-28 15:25

回复 wjp130 的帖子) @ I/ Y, d1 T( F- y# p! ^: f" m% U
8 ~5 Q" Z# q$ p$ o8 i6 U% _
你直接取10mlCIK加到DC培养瓶里这不太好吧，DC培养瓶里有IL-4，IL-4与培养CIK细胞所加入的干扰素作用相反，IL-4诱导TH2型细胞的增殖及分泌TH2型细胞因子。混合培养应该先洗涤DC细胞，以除去DC细胞培养因子。

作者: wjp130 时间: 2012-12-7 14:48

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谢谢

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