干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
请教克隆的挑取
[打印本页]
作者:
your1024
时间:
2012-11-17 20:04
标题:
请教克隆的挑取
请教一下，大家在挑克隆的时候用的是什么来观察要挑取哪些克隆的呢？普通的体式镜么？为什么我用桂光的那种老式体式镜根本就看不到皿里的细胞呢？它那个底部光源是透视过去的，根本就看不清细胞轮廓。大家有什么好的挑克隆的器材和方法能介绍一下么？谢谢！
作者:
eley
时间:
2012-11-17 20:24
一般使用套环法和无限稀释法
% X( T8 O# A5 |7 m# o J6 ~
套环法比较简单，可以去网上自己查一下。
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-18 08:51
回复
your1024
的帖子
* D4 I; \9 O6 Y- @! c
0 O8 `$ j) t2 ^ U
我是在相差显微镜下挑的
作者:
your1024
时间:
2012-11-18 19:29
回复
eley
的帖子
" h5 q% C& h( ~4 r
1 P7 J. U9 i% D
那是在什么镜子下进行的呢？
作者:
your1024
时间:
2012-11-18 19:34
回复
yaolinzhang
的帖子
) @3 o- o! f5 {; s5 e
6 E$ N6 k2 e9 w$ w( {+ H
是那种小型的可以放进安全柜的相差，还是那种大型的，放在室内的？
作者:
eley
时间:
2012-11-18 20:51
回复
your1024
的帖子
. ^) r( _( a/ u
7 n. o7 K$ x* b7 W. a2 K
相差显微镜就可以，我们实验室平常是放在细胞房的，可是要挑单克隆的话，我一般放到安全柜里面照一会紫外，然后在安全柜里面使用，这样有点麻烦，可是避免污染。
: ?! r- H0 _, Z, z5 \7 k9 s
1 p6 |) r2 } L1 t" s, G
最近做了一次，觉得阳性率挺高的，所以就直接用无限稀释单克隆方法了，希望对你有帮助。
作者:
aulenuyah
时间:
2012-11-19 00:04
我一个同门一般都是用体式显微镜的，调整一下光就可以了
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 00:16
回复
eley
的帖子
0 j2 g( r7 h0 w
# b v8 c9 M! ^/ r ~& U, g0 Y$ ^
谢谢你的回答，我们实验室那个相差根本就搬不到安全柜里面去，看来还得想别的辙。能请教一下无限稀释是怎样的方法么？我不是从构建开始做的，有些方法了解的不是很清楚。
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 00:18
回复
aulenuyah
的帖子
% z/ {% U% \8 p; r! ]2 I. j
# v; h# {+ n8 r. L
请问是调哪个光源呢？我那个镜子底部光是透视的，完全看不到细胞轮廓，加了柔光板也没有作用。能详细说明一下么？谢谢！
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-19 08:31
回复
your1024
的帖子
9 b6 h7 n' _5 V; r8 B+ }
& u R. C) V2 G9 X5 L
小型的，在生物安全柜里面
作者:
eley
时间:
2012-11-19 10:55
回复
your1024
的帖子
( t* ?2 r, r: {' c
2 H& S1 v. r* L/ `
就是计算好细胞的数量，然后用培液稀释，分装到96孔板里面
: L( M. D6 q) D, D v" A
保证每个孔板的细胞数量是1个就可以了，
9 C+ R* x' p5 ]- v! z6 b
等细胞长成菌落之后，用抗性去筛选，然后得到的单克隆就是比较好的阳性克隆了
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 15:44
回复
yaolinzhang
的帖子
2 Y" |3 ^. }) J! [
/ I7 H. [# C% g' v# t$ V& z. G
了解了，多谢！想让老板专门买个镜子，不愿意，唉
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 15:51
回复
eley
的帖子
2 _3 C% d# R/ b9 q. K, ~
7 L8 m& h. ^# l: Y K+ A% O2 p
多谢！想想就觉得好繁琐的操作。这种方法是在构建时会用到的吧？正常培养的时候也会这么做么？
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-19 16:03
回复
your1024
的帖子
' W+ I" q8 [: f# G* `7 W; @
5 D5 [) M4 Q6 v% C& Y! M
不客气!其实你也可以在细胞间的相差显微镜下操作，保证无菌就行，另外，需要在培养基里加上抗生素，注意尽量不要接触到培养基。
作者:
eley
时间:
2012-11-19 17:10
回复
your1024
的帖子
1 z) S8 l& I5 j' E h# J2 Z0 j
" z: q- c1 I( O, U: O
恩，如果已经晒到好的单克隆，就正常培养就好了
作者:
aulenuyah
时间:
2012-11-20 00:16
回复
your1024
的帖子
; J$ g0 T; F, z8 F
+ v' [ q3 W6 F
这个，好像不同的显微镜不太一样，我们的一般是用来检卵的，可以把视野调成立体的
作者:
fjnuxp
时间:
2012-11-23 12:17
我们有两种，一种是普通的相差显微镜，另一种是无目镜大屏幕显微镜，都还不错。
作者:
Jonathan
时间:
2012-11-24 08:16
我一般是用那种倒置式的光差显微镜，在开放空间，旁边点一个酒精灯就可以。
作者:
牙牙丫丫123
时间:
2012-11-24 16:36
回复
your1024
的帖子
$ A( a$ F' V4 c8 P
& ]) H! m ]5 p/ {
我们一般使用的是相差显微镜，直接在无菌细胞间内进行操作，操作前一般会对屋子进行紫外照射，使用的时候会用酒精棉等擦拭显微镜，这样一般不会造成污染。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:00
回复
fjnuxp
的帖子
0 r9 ^5 y+ S( u4 j% J b+ M5 z2 S
7 J$ o/ z, r0 R2 C# p
好的，谢谢！那你们是在室内操作还是在安全柜里呢？操作前有什么要注意的么？
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:01
回复
Jonathan
的帖子
# z8 U# O1 J4 u0 V& H* D
9 T: m# e# r( {) f8 F0 G, E
你的操作好犀利啊！这样子都完全没有问题？以前我也这么干过，之前还要照一段时间紫外，但是污染了一次之后就不敢了。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:02
回复
牙牙丫丫123
的帖子
: o: {6 W. j, [, p1 u
U8 e: i }% \" a* |% O. n9 S, B
嗯，之前用的也是那种大型的相差，在室内，不过污染了一次心里老是有阴影了。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:06
回复
牙牙丫丫123
的帖子
- P- D# k( l. }1 h2 |
. ?' U4 u: B' N; d
嗯，之前用的也是那种大型的相差，在室内，不过污染了一次心里老是有阴影了。
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5