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请教克隆的挑取
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作者:
your1024
时间:
2012-11-17 20:04
标题:
请教克隆的挑取
请教一下，大家在挑克隆的时候用的是什么来观察要挑取哪些克隆的呢？普通的体式镜么？为什么我用桂光的那种老式体式镜根本就看不到皿里的细胞呢？它那个底部光源是透视过去的，根本就看不清细胞轮廓。大家有什么好的挑克隆的器材和方法能介绍一下么？谢谢！
作者:
eley
时间:
2012-11-17 20:24
一般使用套环法和无限稀释法
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套环法比较简单，可以去网上自己查一下。
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-18 08:51
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your1024
的帖子
) \4 g6 K3 a4 m o
5 p3 S, o- W {/ z: d
我是在相差显微镜下挑的
作者:
your1024
时间:
2012-11-18 19:29
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eley
的帖子
! R1 e& C, r8 ~# J
" w6 z( `% a- t6 v: c a4 Q
那是在什么镜子下进行的呢？
作者:
your1024
时间:
2012-11-18 19:34
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yaolinzhang
的帖子
$ ]6 P/ ]' h4 t3 z
" i# a# X( ]3 {1 t0 C! y0 U
是那种小型的可以放进安全柜的相差，还是那种大型的，放在室内的？
作者:
eley
时间:
2012-11-18 20:51
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your1024
的帖子
# v; F6 L$ a$ ^3 h
8 r' G- C5 Y0 G/ N- ^3 d
相差显微镜就可以，我们实验室平常是放在细胞房的，可是要挑单克隆的话，我一般放到安全柜里面照一会紫外，然后在安全柜里面使用，这样有点麻烦，可是避免污染。
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最近做了一次，觉得阳性率挺高的，所以就直接用无限稀释单克隆方法了，希望对你有帮助。
作者:
aulenuyah
时间:
2012-11-19 00:04
我一个同门一般都是用体式显微镜的，调整一下光就可以了
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 00:16
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eley
的帖子
! k5 Q' s/ u, X1 N
7 }9 G- e1 f3 ?+ |
谢谢你的回答，我们实验室那个相差根本就搬不到安全柜里面去，看来还得想别的辙。能请教一下无限稀释是怎样的方法么？我不是从构建开始做的，有些方法了解的不是很清楚。
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 00:18
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aulenuyah
的帖子
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. [; R1 j6 L5 Z" k- a8 |
请问是调哪个光源呢？我那个镜子底部光是透视的，完全看不到细胞轮廓，加了柔光板也没有作用。能详细说明一下么？谢谢！
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-19 08:31
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your1024
的帖子
) W, H' k; L4 C1 M. e: s1 x
! @, E6 E0 L# ?7 N9 Z
小型的，在生物安全柜里面
作者:
eley
时间:
2012-11-19 10:55
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your1024
的帖子
$ r1 j0 H! m+ p/ N8 _) b) \" v
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就是计算好细胞的数量，然后用培液稀释，分装到96孔板里面
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保证每个孔板的细胞数量是1个就可以了，
0 o7 ]) X9 s1 D
等细胞长成菌落之后，用抗性去筛选，然后得到的单克隆就是比较好的阳性克隆了
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 15:44
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yaolinzhang
的帖子
* @% q2 D! {4 x
) [ \7 [5 p, [7 |4 \* J2 w Y. l
了解了，多谢！想让老板专门买个镜子，不愿意，唉
作者:
your1024
时间:
2012-11-19 15:51
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eley
的帖子
) D. O2 o6 l4 u" ?. F) N; j t0 ~
) F, E3 B$ i( w/ I, Y9 N
多谢！想想就觉得好繁琐的操作。这种方法是在构建时会用到的吧？正常培养的时候也会这么做么？
作者:
yaolinzhang
时间:
2012-11-19 16:03
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your1024
的帖子
0 o* `) w% I% v. q7 m5 Y, L7 l
4 U% i! ^% K1 F
不客气!其实你也可以在细胞间的相差显微镜下操作，保证无菌就行，另外，需要在培养基里加上抗生素，注意尽量不要接触到培养基。
作者:
eley
时间:
2012-11-19 17:10
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your1024
的帖子
. k9 E( b" L3 j0 k
; Q/ ?; l* H" {1 F; ]$ L' K
恩，如果已经晒到好的单克隆，就正常培养就好了
作者:
aulenuyah
时间:
2012-11-20 00:16
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your1024
的帖子
, f& U1 X* m# h
4 ]$ P0 }( o. d
这个，好像不同的显微镜不太一样，我们的一般是用来检卵的，可以把视野调成立体的
作者:
fjnuxp
时间:
2012-11-23 12:17
我们有两种，一种是普通的相差显微镜，另一种是无目镜大屏幕显微镜，都还不错。
作者:
Jonathan
时间:
2012-11-24 08:16
我一般是用那种倒置式的光差显微镜，在开放空间，旁边点一个酒精灯就可以。
作者:
牙牙丫丫123
时间:
2012-11-24 16:36
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your1024
的帖子
; b3 H$ s+ z5 z! [' {* n7 j
! ]2 d6 N5 S( @$ B7 P
我们一般使用的是相差显微镜，直接在无菌细胞间内进行操作，操作前一般会对屋子进行紫外照射，使用的时候会用酒精棉等擦拭显微镜，这样一般不会造成污染。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:00
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fjnuxp
的帖子
* I1 J8 `0 Y: u: u+ `- i
8 Z, q: } H4 d
好的，谢谢！那你们是在室内操作还是在安全柜里呢？操作前有什么要注意的么？
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:01
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Jonathan
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$ c+ p* c9 Y1 \, l
! X! t0 C( A2 ]7 T+ d
你的操作好犀利啊！这样子都完全没有问题？以前我也这么干过，之前还要照一段时间紫外，但是污染了一次之后就不敢了。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:02
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牙牙丫丫123
的帖子
! w+ W* y7 z3 _8 s$ ~
8 n2 c1 V; f3 |! ?$ |4 V
嗯，之前用的也是那种大型的相差，在室内，不过污染了一次心里老是有阴影了。
作者:
your1024
时间:
2012-11-24 19:06
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牙牙丫丫123
的帖子
6 S- V! }: C- U5 H- Y
) R! C+ Y6 e+ r2 s8 V' h
嗯，之前用的也是那种大型的相差，在室内，不过污染了一次心里老是有阴影了。
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