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标题: 大家来讨论一下如何计算HSC的数目 [打印本页]

作者: xyzin 时间: 2012-11-18 23:04 标题: 大家来讨论一下如何计算HSC的数目

我最近在做一些动员剂如G-CSF处理后检测小鼠PB里HSC的实验，目的是观察动员前后PB里HSC的改变，结果发现通过FACS检测Lin-sca-1+c-kit+(LSK)细胞，并没有显著的率的改变，但动员后PB内有核细胞数明显增多，相应的LSK细胞数也增多。查阅了一些文献，多是将其换算成每mLPB里包含有多少HSC数目,具体怎么换算，准确率如何，请教大家了！

作者: xupanglian 时间: 2012-11-19 09:27

你取了多少ml PB，这里面经过流式分析其中有多少HSC数量，除以体积不就是结果了么？

作者: xgl200 时间: 2012-11-19 10:06

动员到PB的HSC可能不会那么多，所以FACS上体现不出来你的效果，或是说没有统计学上的意义。你可以培养一下HSC，看与对照组有无统计差异。

作者: chutu 时间: 2012-11-19 23:44

这样计算可能接近真实：定量（体积）取抗凝血样，收集细胞进行染色，确保处理过程没有细胞丢失（近似），制好的FACS样品体积准确定量，然后取一滴细胞悬液在血细胞计数板上计数有核细胞数，可算出流式样品中的有核细胞总数。其余样品用FACS分析确定LSK在有核细胞中的比例，可算出流式样品中的LSK细胞数目，最后换算到取的血样的体积里

作者: xyzin 时间: 2012-11-20 14:13

楼上说的有道理。我这两天看了看资料，应该可以这样计算：取血后通过血细胞计数仪计出外周血WBC数/mL，同时取100ul血样处理标记抗体，FACS检测，确定LSK在有核细胞中的比例，随后将这个比例带入到血样WBC数/mL里，得到HSC数目/mL PB。这个指标应该可以相对客观的衡量HSC的变化。

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