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求脐带间充质干细胞酶解法
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作者:
xuzhijuan1989
时间:
2012-11-28 22:56
标题:
求脐带间充质干细胞酶解法
查阅相关文献说脐带酶解法用胶原酶和胰蛋白酶先后各消化30min，想请问下，胶原酶消化后需要离心吗或者怎么去掉胶原酶？消化后的液体很粘，很难过滤，请问应该怎么解决？过滤选择怎样的滤器比较好呢？现在用的是300目的，感觉效果不是很好，望各位前辈指教，谢谢！
作者:
mkhorse
时间:
2012-11-29 08:37
脐带细胞我们都是用组织块法，感觉还是比较简单的。可能比消化法培养原代时间会长一点。用酶消化后应该是要洗涤、离心将酶去除吧。
作者:
caiyu07248
时间:
2012-11-29 11:33
胶原酶当然是通过离心去除掉，消化完后过滤用300目的也太难过滤了吧，我用的是200目都觉得比较困难，我的经验是，过滤前先用PBS冲洗组织块，然后离心，将上清倒掉，这时候上清很粘，倒的时候不要将上清全倒了，因为组织块离得并不是很紧，留下一些，防止把细胞也倒了；重复一遍，第二次去上清后，加入适量的pbs洗一下，然后再进行过滤，觉得这样会好很多，不会那么粘了。
作者:
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时间:
2012-11-29 19:41
我们用的200目的，感觉还可以吧，你用的胶原酶几型的呢？
作者:
xuzhijuan1989
时间:
2012-11-29 21:45
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的帖子
/ S& y% J9 i% P
( f3 q/ y9 h B% [+ x3 R1 M- x
胶原酶2，可能是300目太小了吧
作者:
xuzhijuan1989
时间:
2012-11-29 21:45
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mkhorse
的帖子
* V0 |, s. D( \ Z" X
& T' X- }8 k, g: _: f/ L, A
谢谢
作者:
xuzhijuan1989
时间:
2012-11-29 22:23
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caiyu07248
的帖子
3 P7 \1 l9 t* Q) n1 ?8 } e
! n- r" `0 @5 l& a* l4 ^* h
呵呵，你的这种方法看来挺好的，谢谢啦!
作者:
弑之使徒
时间:
2012-11-29 22:31
用点PBS缓冲液来稀释，再用200目过滤吧，这样会轻松点的~
作者:
弑之使徒
时间:
2012-11-29 22:31
用点PBS缓冲液来稀释，再用200目过滤吧，这样会轻松点的~
作者:
452359357
时间:
2012-11-30 13:22
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弑之使徒
的帖子
& {; T& v/ u, n& ?" [* [ V5 ?
7 h- {2 R! s \4 F: R
我们直接用100目的过滤， 要中和胶原酶 胰酶直接加1-2ml的血清就可以了 不用离心的
作者:
笨球球开心
时间:
2013-2-1 18:43
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caiyu07248
的帖子
) U& u, I" V- D
# o6 ?7 z8 v- Z, g( h8 T4 {
那请问转速多少，几分钟较好？？
* m% Y( j& I2 Z- d; f
作者:
笨球球开心
时间:
2013-2-1 18:46
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xuzhijuan1989
的帖子
+ | i' F* {+ e& y
3 W; ^ q! [% S0 L3 [ n
你用的组织块体积：胶原酶比值？一般消化多久？消化终止是什么状态？有图片最好……求助……谢谢
0 m& B# d7 q- _7 k
作者:
笨球球开心
时间:
2013-2-1 18:47
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mkhorse
的帖子
- \9 J7 ?' l& K9 E$ Q) Y/ C
7 _) x2 H) |1 X7 B
组织块法步骤是怎样？？求助，谢谢！！1
作者:
细胞海洋
时间:
2013-2-2 21:24
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笨球球开心
的帖子
4 O* q% ~9 A+ D4 i/ c, K
! D" R2 n3 F; R' ^1 }8 k& S/ `
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作者:
湖南干细胞
时间:
2013-2-2 22:54
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caiyu07248
的帖子
) ]% C7 l/ o9 q3 M7 V- m
) o* G5 b& ~6 m ^7 ]$ C
那你的离心参数如何，最总离心下了的间充质细胞多不？
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我因为没有细胞筛，首先加PBS稀释，2500转/分，15min离心，弃上清；
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再加PBS稀释，1000转/分，5min离心；留上清，
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再加PBS稀释，2500转/分，5min离心，弃上清，离心管底基本上没有细胞有一些膜一样的白色物质，可以吹散。
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添加培养基吹散，加入铺好多聚的培养瓶培养，镜下观察发现细胞很少。我的一条脐带十多厘米，剥离动静脉后，剪成2-4mm3小块，消化4h后经过上述，离心步骤，得到的细胞很少。求助啊。
作者:
夏日晨星
时间:
2013-3-20 22:31
我们之前也是酶解法，直接加2ml血清就可以，不用稀释神马的~ 现在用的爬片，个人感觉比酶解方便多了
作者:
youlesi888
时间:
2013-3-21 16:53
用点PBS缓冲液来稀释，会简单点
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