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标题: 做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？ [打印本页]
作者: huajie881026    时间: 2012-11-29 22:09     标题: 做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？

今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的抗体可以做免疫荧光吗？查了BD的网站，有的既可以做流式又可以做荧光，我买的抗体上面只写了流式，这样是不是说明不能做了呢？做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗？？？在此请教！
作者: sun_happone    时间: 2012-11-29 22:26

流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话，在同等条件下，当然选择做荧光抗体啦，但实在没有，流式抗体还是可以用的，不过最好马上去荧光显微镜下看结果，时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色，效果还可以。
作者: huajie881026    时间: 2012-11-29 23:30

回复 sun_happone 的帖子
/ ^* K* ^6 s- x+ N) O
* W4 u7 g# ?! f6 @6 F请教具体步骤怎样？
6 x" k9 d# |3 r
作者: huajie881026    时间: 2012-11-29 23:32

回复 huajie881026 的帖子! H# V1 ]; _9 }# G

  y' [; c( d8 }; m3 ~$ i用4%PFA固定细胞10min，PBS洗3次，然后1%BSA封闭1h，再用抗体标记可以吗？
* B" O; I! @" q5 _' b. Y如果我需要用DAPI染核岂不是要用Triton-X100破膜处理？
作者: meister    时间: 2012-11-30 15:37

回复 huajie881026 的帖子6 l( J; A3 L& u7 I) Z. {# U, n7 E- U

6 u3 c; s" F% O  G' D. T! I+ g当然可以了， 不过荧光抗体不一定能做流式
作者: meister    时间: 2012-11-30 15:37

回复 huajie881026 的帖子0 f) \0 f3 |* O  I0 V& A7 u

- _8 S! N3 O2 `2 Z$ t/ [4 }! L1 _) \PFA固定，都要破膜处理
作者: sun_happone    时间: 2012-11-30 16:33

回复 huajie881026 的帖子5 |% m# E2 C6 O" Y: u5 v$ x

  f; ~6 t/ ]" M# w是否要破膜，要看你在膜上表达还是在核内，如果在膜上，就不需要破膜，染DAPI不需要破膜的，另外，封闭的话做好用3%BSA，有血清BLOCK更好。
作者: huajie881026    时间: 2012-11-30 16:38

回复 sun_happone 的帖子
6 H' D/ k( j2 K, j2 Q* g% q) C" U( d1 f$ p4 @, G! c9 x5 h
那抗体稀释比例多少较好呢？
作者: sun_happone    时间: 2012-11-30 16:39

回复 huajie881026 的帖子' {8 c3 [7 B( d( [! @

1 ?+ u: l% Q4 q这个看说明书就好了，没有特定的稀释比例的，每个抗体不一定一样。
作者: receiver1    时间: 2012-11-30 23:14

流式和免疫荧光的原理是相同的，做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的，抗体直接带标记，因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗，实际上有一定的信号放大作用，信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话，那就一样了。我一般不用直标的抗体，而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体，因为有的时候需要同时用几种抗体，间标（用二抗）的选择起来灵活些。
作者: cinderella颖    时间: 2015-5-26 14:49

huajie881026 发表于 2012-11-29 22:09 7 O! T5 i, f5 k" C; ~5 E
今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的 ...

5 m; j$ \$ e2 O7 ]$ }4 L6 _! o老师您好，我也要做MSC的流式和免疫荧光。看了您的帖子，想问，我手里有abcam做免疫荧光的抗体拿来做流式可以吗？不是直接标记的。谢谢
作者: zxkll    时间: 2015-5-26 14:52

本帖最后由 zxkll 于 2015-5-26 14:53 编辑
" g9 f  k6 U3 `$ x* |& j* a$ ]7 H9 ~/ g. _0 t
comment deleted
作者: cinderella颖    时间: 2015-5-26 14:53

huajie881026 发表于 2012-11-29 22:09 7 n) G- v3 E$ t4 A9 Q; D% ]
今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的 ...
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老师，我之前发的帖子，您有空可以去看看嘛？谢谢。http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... p;page=4#pid1223827
作者: ywx6302706008    时间: 2015-10-24 18:47

流式抗体一般可做免疫荧光，但反之则不然



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