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标题: 同时提取DNA和RNA [打印本页]

作者: bb6120 时间: 2012-12-1 20:41 标题: 同时提取DNA和RNA

不知道有没有大侠同时从细胞中提取DNA和RNA不？小弟最近用TRIzol同时DNA，RNA。DNA的提取效果一直都不好，降解严重。恳请各位大侠支招！！！！或者还有什么其他方法可以同时提取DNA和RNA吗？" a7 [ Q4 q& _/ M3 B5 ^& T
先谢过各位大侠！

作者: 86964109 时间: 2012-12-2 11:29

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我们也是trizol法参照http://refer.biovip.com/doc-view-9190.html做的，DNA部分基本只用醇沉就好了，收率还可以啊

作者: 452359357 时间: 2012-12-2 14:25

你可以讲样品裂解后分成2分一份提DNA 一份提RNA 也可在提RNA时从第三步离心后的沉淀中提取DNA （这步含DNA较多）

作者: bb6120 时间: 2012-12-2 21:15

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这个步骤我也有的，我也是参照这个步骤，但是提出来的DNA到最后都是有降解的。你们提的DNA没有降解吗？能给我说一下你们的一些细节吗？比如说，pH为8.5的0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇），你们是怎么配的，怎么保存？先谢过！

作者: bb6120 时间: 2012-12-2 21:17

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关键不是样品的问题，是我最后提出来的DNA质量不好。就算同时裂解两份，最后的操作步骤还是一样的。所以并不是裂解的问题。

作者: 86964109 时间: 2012-12-3 08:57

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我们沉淀DNA一般只用无水乙醇（DNA溶液：无水乙醇 =1:2），如果额外加的话会加3M醋酸钠（30μl），醋酸钠是正常溶解的，保存于室温或4度，能用好久

作者: bb6120 时间: 2012-12-3 11:43

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你们不是按照TRIzol说明书来做的吗？能给一个详细一点的修改后的步骤吗？先谢过！！！！

作者: 86964109 时间: 2012-12-3 14:12

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有些记不清了，不过我们做的应该很简单，氯仿处理离心分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃12000r离心5分钟。
　　2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留）用无水乙醇沉淀DNA。每用1mlTRIzol加入1ml无水乙醇，-20放置2h以上，2～8℃12000r离心10分钟，弃上清。 $ m: s" Y: r) e0 H
　　3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入0.3 ml75%乙醇，2～8℃2000r离心1分钟，吸弃上清。 3 X0 M* h( q6 r: {3 c# F) Q
　　4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用ddH2O溶解DNA。

作者: bb6120 时间: 2012-12-3 16:52

回复 86964109 的帖子0 U, }& Z, g m1 Q# v. p
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哦，谢谢啦！我按照你的方法再试试！！！真的非常感谢！！！！

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