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标题: 求助：CIK细胞培养 [打印本页]

作者: immyouyou 时间: 2012-12-6 15:47 标题: 求助：CIK细胞培养

我培养人外周血的CIK细胞在第5天1瓶传2瓶扩增后，集落就紧紧地贴在壁上，而且周围有很多梭形或长长的细胞，晃晃培养瓶也很难漂起来，再继续培养下去，往往集落就会越来越少，细胞变得越来越大，感觉很杂乱，请教一下，怎么回事？
是培养基的量多了还是少了？
血清浓度10%，可以吗？( p& L/ B1 b/ D, R! Z% k
IL-2 1500U/ML IFN-r 1500U/ML,浓度大了还是小了？
谢谢！

作者: kyo000 时间: 2012-12-6 16:37

最好是上张图来看下，更好判断……
还有用的什么样的培养基，我们之前用的也是10%的血清浓度，后来换了无血清培养基，
个人感觉用无血清培养基养的细胞更好点……; ]; }, d( L, q* ?* M- E
因子浓度好像大了点……

作者: 花饶然 时间: 2012-12-6 16:57

我也遇到过这种情况，但是极少，那么多份外周血中就遇到过一次这样的情况，我想会不会和病人自身有关，他抽了两次血，两次的细胞都是这样的。开始悬浮细胞就比较少，一般贴着在，到第7天感觉有一部分梭形的细胞了，跟间充干一样形态。后来几乎都没什么悬浮细胞了，都贴壁了。求指教！

作者: hwlightning 时间: 2012-12-6 17:36

1000U

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-12-7 10:34

因子浓度是高了点，一般的都是用的1000u的。培养了一次外周血的长的很不好，最后干脆都死掉了，但是没出现楼主的这种情况，只是刚开始长的很快集落也很大，后来一个周后就几乎不长了，慢慢的都死了。。。

作者: stang198651 时间: 2012-12-7 11:13

因子浓度是有点高了，一般1000u，再低点500u也还可以。

作者: immyouyou 时间: 2012-12-10 11:14

我传2张照片，大家看看，个人感觉CIK还未成熟或过成熟，细胞因子的浓度很重要

作者: immyouyou 时间: 2012-12-10 11:15

[attach]48107[/attach]

作者: immyouyou 时间: 2012-12-10 11:15

[attach]48108[/attach]

作者: hwlightning 时间: 2012-12-10 11:22

细胞密度也很重要，不要传的太稀。

作者: kiss2346 时间: 2012-12-10 11:33

IFN-r 1000U/ML 一般先于IL-2加入 IL-2也是1000.或者考虑500也可以。具体问题出在哪不太好判断。以前也遇到过贴壁细胞特别多的时候但是跟你这个还不太一样，感觉像是细胞干性不足。。。。。

作者: 蓝O海 时间: 2012-12-10 13:42

细胞传的太稀了，血清的浓度、因子浓度都大，建议因子1000，血浆5%9 d8 B: a8 v9 m& ]8 F* ~; `5 K# \( T

作者: ly200101042 时间: 2012-12-10 15:29

我觉得和病人有很大的关系，我也做CIK培养，有的病人就是这个样子，而且如果细胞太密了也会出现这种情况，不过IL-2我用的最大浓度时1000U/ml，我觉得你可以换个病人再做下，如果还出现这种情况你可以调整下细胞因子浓度或者细胞的浓度。

作者: yinfuhua 时间: 2012-12-11 00:21

我认为是由于细胞因子浓度大了，使细胞过度增殖造成的这种现象。

作者: yinfuhua 时间: 2012-12-11 00:22

这两张照片是培养几天的？

作者: hwlightning 时间: 2012-12-11 08:17

个体化治疗就会出现各种各样的情况，状态比较差的病人细胞情况也会很糟糕，当做完第一次生物治疗，第二次采血培养后就会有很大的改善。6 E& S. G9 o" k' g9 h7 E, ^2 }% U
如果排除病人个体原因的话，你可以考虑是不是CD3单抗或其他因子的效价是不是降低了，导致细胞没有活化。$ v9 E" `* |) y! R3 o' }7 p

作者: immyouyou 时间: 2012-12-12 12:54

回复 kiss2346 的帖子

您好！请问细胞的“干性”怎么判断？

作者: immyouyou 时间: 2012-12-12 12:58

回复 yinfuhua 的帖子! d' r9 b: \/ h3 s5 T; X

培养第11天，中间传代1次，补液1次。

作者: labspring 时间: 2012-12-12 15:13

本帖最后由 labspring 于 2012-12-12 15:13 编辑

如果不是病人自身的原因，可以IL-2考虑调为1000U/ML，细胞保持在0.5-1*10^6/ML左右

作者: yinfuhua 时间: 2012-12-12 16:23

回复 immyouyou 的帖子, d; z: Q% C7 o5 w" C2 I% C

一般来说，补液和传代间隔大约3d为好。也可以根据细胞状态调整加液时间。你是否间隔时间太长了？

作者: wjp130 时间: 2012-12-12 16:53

回复 immyouyou 的帖子/ J& `2 [- k. K9 X. z1 I
! z9 K# D1 ?- Q! a5 c! O
这张图是有霉菌污染吗？怪怪的

作者: immyouyou 时间: 2012-12-13 11:12

回复 hwlightning 的帖子
7 k' z8 m: q& J2 b+ o) W! }
虽然我的细胞因子浓度有点大，像您提醒的有可能因子效价降低，我感觉细胞还是没有活化好。论坛里的高手好多呀，讨论真的很热烈，谢谢大家

作者: hwlightning 时间: 2012-12-13 15:02

回复 immyouyou 的帖子
: m+ g( I4 | g
个体化治疗就会因人而异，出现一些现象是正常的。可能换另外一个人的外周血培养就不会出现这种情况了。
做的多了，经验是靠慢慢积累的。
以后可以相互交流下

作者: immyouyou 时间: 2012-12-14 11:54

回复 hwlightning 的帖子
2 R& } y2 } h0 W/ }) N

作者: bloodroses 时间: 2012-12-18 19:55

5天传瓶的时候，细胞计数了吗？细胞密度多少啊？
我用6孔板养过，密度1*10^6,因子没有加那么多6 ?/ T4 A+ T0 Z$ s
IL2只有300U/ml.外周血的，14天双阳率到了50%。

作者: kiss2346 时间: 2013-1-7 08:43

回复 immyouyou 的帖子

观察细胞状态，确定细胞增值能力，还有个人感觉你加液频率有点低

作者: sunny.yc 时间: 2013-1-10 13:36

回复 bloodroses 的帖子

朋友，那你6孔板是怎么接种数量，最终数量又是多少呢，双阳50%我很欣赏呢

作者: bloodroses 时间: 2013-1-10 14:18

回复 sunny.yc 的帖子
. G% z2 H; i) C( p7 w$ {
接种每孔3*10^6个，
养了14天，最终数量是7~8*10^6.

作者: sunny.yc 时间: 2013-1-10 14:23

回复 bloodroses 的帖子# B1 B4 K- r# y# P4 E6 P

十分感谢，那你们数量是3X10^6，那是多少体积呢，我觉得你的细胞养得很好

作者: echono 时间: 2013-3-10 22:13

第一直观感觉培养不好的主要原因出在患者的身体状况

作者: flys100 时间: 2013-3-11 14:01

第一因子浓度大了。6 ?8 d- ~, n% Z2 @2 `9 v
第二至于培养基多少嘛，不知道你的初始细胞浓度怎么样，不敢说。
讲下个人操作吧：INF 1000U IL-2 1000U，IL-1 100U，抗CD3 50ug，
100ML开始，3天后补液，以后流程几乎都一样，至于你说的5天扩瓶，
细胞密度也是一块，细胞密度过大也不行，这个自己多看多对比吧。

作者: chenguangyu 时间: 2013-3-11 14:05

细胞因子浓度高了，血清浓度也高，建议用无血清培养基

作者: 硕果累累_555 时间: 2013-3-11 16:13

无血清培养CIK细胞比较好，CIK呈悬浮生长，在瓶中培养时如果倒置培养，其中的成纤维细胞容易成贴壁生长，而淋巴细胞回呈悬浮样生长，还有很多混杂细胞，所以很混乱。你用血清培养的话，血清会诱导细胞贴壁的，所以很混乱的。建议无血清培养CIK细胞。

作者: lyj-0017 时间: 2013-7-6 22:59

回复 kiss2346 的帖子! K& |/ W/ ^3 e

你认为转袋之后应该多长时间加一次培养基呢？按照什么标准加液呢？

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