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标题: 做ES的qPCR时用什么内参 [打印本页]

作者: markllq 时间: 2012-12-13 19:25 标题: 做ES的qPCR时用什么内参

请教各位：大家有没有发现在做qPCR时，actin在ES和MEF当中是不齐的，大概ES的CT值要比MEF大2个cycle。我开始以为是偶然现象，但是现在加起来做过几十次了，每次都是这样。是不是因为actin的绝对表达量在ES当中确实比MEF要低？如果actin的表达量不一致的话，用它作内参还行得通吗？有没有比它更好的内参？谢谢！

作者: chentian820 时间: 2012-12-14 09:45

GAPDH 和RPL19都是可以的

作者: markllq 时间: 2012-12-14 10:27

回复 chentian820 的帖子: x! d0 J( ^0 `

谢谢！能否再详细一点，这两个内参在MEF和ES当中的表达量如何？

作者: wuzhoulingxiao 时间: 2012-12-14 12:50

GAPDH或ACT B，都可以，这两种作为内参，因为即便是不同的细胞其中这两种基因的表达量都是相同的。

作者: lazyworm 时间: 2012-12-14 13:15

CT值不同会不会是模板的量不同造成的啊

作者: chentian820 时间: 2012-12-14 13:57

回复 markllq 的帖子
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这么跟你说吧管家基因在不同的细胞的表达只能说是相对恒定的。你要比较不同细胞中的actin表达情况，建议做一下northern或者绝对定量PCR，这样你就能看出单位质量的总RNA中有多少actin。

作者: yueweilei 时间: 2012-12-14 14:28

GAPDH

作者: exin11 时间: 2012-12-14 15:34

GAPDH，actin在早起胚胎发育以及ES检测，表达上均存在变化！

作者: 芦苇浅 时间: 2013-10-17 22:26

如果模板量有差异的话，也会导致Ct值出现差异啊。我觉得在做RT-PCR时并不能保证反转的cDNA量是一样的

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