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标题: CIK细胞是否污染了？ [打印本页]
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-16 21:47     标题: CIK细胞是否污染了？

本帖最后由 zhuzhentulip 于 2012-12-16 21:55 编辑
- R3 _) P- @; j4 B
% d$ e7 y: r1 \! V5 s    图1和图2 我怀疑是真菌污染，但我取了部分培养物出来离心沉淀后涂片，进行革兰染色，却没有看到有真菌，然后又取部分培养物进行细菌培养，分别接种在一个血平板和一个沙保氏培养基上，5天后都未见细菌生长。图3和图4是我半换液后第二天观察时看到的情况，此时未见图1和图2中的成串的圆的像真菌一样的东西了。
( ^+ \/ Q1 M$ Y0 M$ J# J   请问大家这是不是真菌污染，如果不是污染，那东西又是什么呢？
8 ?. {8 j* p! c) [. R8 W5 l/ P4 i
) |) o0 x& D& G3 ]( {0 R# M图1% G$ X* M% L* v

; T8 l) P4 M: U) I6 ][attach]48270[/attach]' g7 r  t' ^, S2 T* y

! a; v+ Y5 A/ n: v+ {图2. g0 f. ]5 l* K  `  c, i4 s) w

. A# t  k1 y( u* W8 ~, u[attach]48269[/attach]& q- A% C  b9 F
. v( o$ t% L  V, f5 O
图3
7 q; C, n6 x, c2 o) N# J, P' K1 k( e3 m
[attach]48271[/attach]5 Y" e) m5 X& I
# M3 x6 ?2 N( J6 ~6 f, J$ i. r$ J
图4
  v" L6 j0 ~0 \7 }" ~4 r+ y% a; l" o7 N  s4 [, }0 V$ L
[attach]48272[/attach]
作者: stang198651    时间: 2012-12-16 22:36

回复 zhuzhentulip 的帖子; S. x  \' w/ F- P  t! K( S
9 A, F2 u$ W: \8 I) K- l
我觉得是血小板，血小板凝集在一起，不是细菌污染，早期能看到，后期就裂解死亡了，就看不到了。如果是污染，图3和图4中一定能看到，且会更多。
作者: 大少爷    时间: 2012-12-17 08:21

不像0 G; J0 w) m3 r8 _5 {/ W& I. o- V
作者: hwlightning    时间: 2012-12-17 08:23

如果是真菌污染，你得细胞状态会很差。
作者: jiguojie87    时间: 2012-12-17 09:51

不是污染
作者: jenvy121    时间: 2012-12-17 10:27

，你的细胞是刚刚培养的吧，明显的血小板，你换液低速离心后比较轻的血小板就不见了，不过你的细胞还是挺脏的，还是要低速离心换液好一点，要不死细胞碎片影响细胞生长
作者: yinfuhua    时间: 2012-12-17 10:39

回复 zhuzhentulip 的帖子9 l! W7 I* ~, n% z3 _

9 C9 O6 I7 I( A9 D3 L+ o; o请问图1图2的照片是培养几天拍的？如果是血小板，做革兰氏染色应该可以看到的。血小板折光性没有这么强（不会这么亮，与血细胞的亮度差不多）。
作者: lyj-0017    时间: 2012-12-17 10:42

不像细菌和真菌污染。真菌的菌团不会这么多且小；细菌污染的话，培养基会看到很明显的浑浊。应该就是战友们说的血小板，培养后期一般就会自动裂解死亡
作者: wjp130    时间: 2012-12-17 11:52

真菌污染会看到菌丝，像杂草一样生长，有时候会看到孢子，
作者: suning5    时间: 2012-12-17 12:33

第一，如果是污染的话，是葡萄球菌感染，是细菌，而不是真菌。第二，从大小来看，很可能是血小板
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:36

谢谢你们的回答，应该不是污染了，如果是污染的话，细胞早就死亡了。不知道是不是血小板了 因为图1和图2 是第8天照的，前几天没有这种东西。有人说可能是脂滴，像不呢？
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:39

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7 A& R" ?' d; L# B- L
  q; ?! e( H& R0 [; ~谢谢你们的回答，应该不是污染了，如果是污染的话，细胞早就死亡了。不知道是不是血小板了 因为图1和图2 是第8天照的，前几天没有这种东西。有人说可能是脂滴，像不呢？
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:41

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# H. j+ C1 o. g7 j' y7 t' M
: S) M1 j( T9 h- n, ?怎么低速离心换液啊？离心力多少？洗几次？
作者: yinfuhua    时间: 2012-12-18 00:00

回复 zhuzhentulip 的帖子$ m& s- r( y- U2 F$ C: k0 Y- l
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这个亮度确实和脂肪滴（球）的折光度很像。
作者: bloodroses    时间: 2012-12-18 19:49

看着不像污染，
. J, F5 `. @1 L; _建议如果重新分离细胞培养时，可以多洗涤两遍，
( X# g3 L3 W' ^根据细胞情况，隔天半量换液，这样看起来应该就会干净些的。
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-18 22:10

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. u  A, Z' y8 R* X) B0 W0 J9 d* M1 y7 H9 Z. ^3 M8 j$ M
就是
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-18 22:10

回复 yinfuhua 的帖子
, }; p8 F" O. z* M4 l6 T5 m, u( U& B, q4 g' ?2 @
是的
作者: bloodroses    时间: 2012-12-18 22:28

本帖最后由 bloodroses 于 2012-12-18 22:28 编辑
5 ]3 k8 j% ?0 K6 M: t+ A- M$ E, t5 y5 z# G. [
回复 zhuzhentulip 的帖子! [" |  C- b8 u7 m; ?

7 K& ~0 D. p% o, p9 K; C离心换液时，我是用90g离心5分钟的
作者: zhanglei1414    时间: 2012-12-19 23:03

污染没污染看培养基颜色和浑浊度就能看出大概
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-20 21:45

回复 zhanglei1414 的帖子
8 j9 }+ [7 A: z1 A! q$ j3 j* e2 y5 S9 m( t' a5 t8 x% c
细胞数量多了以后培养液隔天就会变黄的啊,也会有颗粒,也是浑的啊
作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-20 21:45

回复 bloodroses 的帖子8 ~6 r" x' r. B
8 ]" J7 ]) t. v
那转速只有100多了,是不是?
作者: bloodroses    时间: 2012-12-21 19:43

回复 zhuzhentulip 的帖子
4 r  p; O: {2 y
9 B' {9 d3 C0 a' Y: I这个要根据离心机的具体情况而定了
, v$ o7 v9 {; ^* N! {5 x, q如果离心半径比较大，那么转速就低一些。
作者: xu_shufen    时间: 2012-12-25 07:32

是真菌污染，此种细菌有一个特点，它的生长不影响细胞生长，只有细胞菌长到一定程度时才影响细胞生长，且成串生长类似葡萄状，是真菌的一种酵母菌。你可进一步鉴定。
作者: kiss2346    时间: 2013-1-7 08:57

个人觉得是血小板可能性很大，前几楼低速离心的建议不错，可以采纳
作者: easternliu    时间: 2013-1-9 13:46

bloodroses 发表于 2012-12-18 22:28   ]4 n% R2 O8 w- h& d
回复 zhuzhentulip 的帖子: q& R- n% A5 p" ^5 J

' F% W5 S: ~  w" M$ m& w1 u离心换液时，我是用90g离心5分钟的
6 Q7 U( E6 c; r, I) H8 z% U2 u6 {
CIK细胞这么小，90G？我们都用的600G离心的，这差距太大了吧
作者: echono    时间: 2013-3-10 22:24

应该不是污染，正常的。放心好了，
作者: flys100    时间: 2013-3-11 13:51

确定不是污染，目测是杂质，后两个图看起来，质量很差吧。
作者: 漂泊的风    时间: 2013-3-18 11:23

不是污染，没事的，细胞挺正常的
作者: realff    时间: 2013-3-29 16:16

回复 zhuzhentulip 的帖子# ?9 E2 C% i7 E/ W

" t2 g/ K" O! @我也认为可能是脂滴哦，以前也为这个怀疑过。当时认为这种杂质来自血清，然后就单独拿加了血清的培养基和空白培养基做对比，都放进培养箱。发现加了血清的培养基逐渐出现杂质，越来越多，检测也没有染菌。同时另一瓶没有出现这种情况，所以我判断很可能是脂滴之类的。
作者: 雁南飞    时间: 2013-3-29 16:35

是不是脂滴
作者: hotcell    时间: 2013-3-30 14:28

有可能是支原体或衣原体污染
作者: zhuzhentulip    时间: 2013-7-9 20:17

回复 realff 的帖子& P5 u) ]! X) [/ \% B$ I6 ~4 r
. @2 B3 m9 w7 S3 x* I5 `
我也这样认为，加血清的培养基逐渐出现杂质。
作者: mtdj1314    时间: 2013-12-11 13:50

回复 stang198651 的帖子( v; X* L+ N- P" G

9 @. L! Q# p. i# J3 Q你好，我想问下，CIK早期培养时看到很多黑色，似乎杆状，能动的，是血小板还是污染？培养基颜色变化不明显，轻轻晃有沙状物，显微镜下可见很多比细胞小的杆状物，颜色深，细胞本身透亮，似乎没有受影响。那这是血小板还是污染？
作者: 孙帅帅    时间: 2013-12-13 14:52

革兰氏染色  能染真菌？
作者: 星空雾雨    时间: 2013-12-27 15:21

回复 easternliu 的帖子
. b/ |4 Y$ n* A* `3 X! t
3 w- O8 z% y7 ]. N9 W1 m不是用2000rpm的转速吗    差距这么大吗  你们的转速是多少
作者: easternliu    时间: 2013-12-30 09:48

星空雾雨 发表于 2013-12-27 15:21
) _% V) d5 W) H回复 easternliu 的帖子- p* t# l4 S+ j9 a# Q8 W% u
3 O7 N* z9 _$ ]) V; a! @
不是用2000rpm的转速吗    差距这么大吗  你们的转速是多少

+ k. j: L5 r' k4 n  Q0 Z, x  H不同离心机讲转速是没意义的，离心力是转速和半径两个因素决定的，同样的2000rpm，在你那儿可能是400g，在我这儿是700g，所以和别人交流的时候，我们一般不说RPM。之前我说错了，我们离心一般是 300g，10min。
作者: zhuzhentulip    时间: 2014-5-31 00:16

回复 孙帅帅 的帖子
& e, w" J2 k7 Y- Z- A
& z3 c* s8 q$ E3 m( q革兰氏染色当然可以染真菌了 真菌为紫色 革兰阳性
作者: zhuzhentulip    时间: 2014-5-31 00:17

回复 星空雾雨 的帖子6 \4 P9 P$ A2 }2 U

5 K/ J, i3 E2 I6 u0 c. ^. T" U要看相对离心力 离心机不同 相对离心力也不同 分单核细胞的时候我们用的离心力是600g
作者: yj729506    时间: 2015-11-9 13:37

请问你的这个情况解决了吗？
作者: zhengjianwei521    时间: 2015-11-9 14:55

应怪不是，你这是刚培养的吧



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