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标题: CIK细胞是否污染了？ [打印本页]

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-16 21:47     标题: CIK细胞是否污染了？


8 J+ {( V/ h2 P  Q# B
% L2 p/ Y" m2 I* t    图1和图2 我怀疑是真菌污染，但我取了部分培养物出来离心沉淀后涂片，进行革兰染色，却没有看到有真菌，然后又取部分培养物进行细菌培养，分别接种在一个血平板和一个沙保氏培养基上，5天后都未见细菌生长。图3和图4是我半换液后第二天观察时看到的情况，此时未见图1和图2中的成串的圆的像真菌一样的东西了。2 l( h- O- a1 l: P
   请问大家这是不是真菌污染，如果不是污染，那东西又是什么呢？
1 o6 L, X0 n7 D/ G( j% u1 `7 O; {3 Z& d2 R0 g" _) E& }
图1
4 v- [! C: V* w) b, b  y
, A0 J8 x" x' T- L[attach]48270[/attach]
/ z. {; }8 X: E9 I2 `- {: f: z2 W8 E6 Q
图2
9 T/ n  h# ?( ~( w0 {4 b
! b. Y8 D- Z7 h& D4 a8 t[attach]48269[/attach]- L. R$ [, `; J# a% [
* V7 w& W( P. c* w7 E
图3, A5 z, d: R! e

5 u% r& u% p. M; T; ?5 }[attach]48271[/attach]
5 z* H: P) \7 @  x
" a/ k4 {1 A$ F  D2 F1 {# I* c图4
6 _1 G+ G  h9 y" ]9 `8 p% W0 V2 [2 V0 N
[attach]48272[/attach]

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作者: stang198651    时间: 2012-12-16 22:36

回复 zhuzhentulip 的帖子2 J6 J; `. g4 ?" l

5 T0 p2 c1 q, U我觉得是血小板，血小板凝集在一起，不是细菌污染，早期能看到，后期就裂解死亡了，就看不到了。如果是污染，图3和图4中一定能看到，且会更多。

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作者: 大少爷    时间: 2012-12-17 08:21

不像
; E7 ^& t7 K- S- S6 ~& g

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作者: hwlightning    时间: 2012-12-17 08:23

如果是真菌污染，你得细胞状态会很差。

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作者: jiguojie87    时间: 2012-12-17 09:51

不是污染

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作者: jenvy121    时间: 2012-12-17 10:27

，你的细胞是刚刚培养的吧，明显的血小板，你换液低速离心后比较轻的血小板就不见了，不过你的细胞还是挺脏的，还是要低速离心换液好一点，要不死细胞碎片影响细胞生长

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作者: yinfuhua    时间: 2012-12-17 10:39

回复 zhuzhentulip 的帖子5 d4 _8 e1 d+ X2 h+ b. O8 |! X' J

2 u3 v& a4 l/ _0 e) Y请问图1图2的照片是培养几天拍的？如果是血小板，做革兰氏染色应该可以看到的。血小板折光性没有这么强（不会这么亮，与血细胞的亮度差不多）。

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作者: lyj-0017    时间: 2012-12-17 10:42

不像细菌和真菌污染。真菌的菌团不会这么多且小；细菌污染的话，培养基会看到很明显的浑浊。应该就是战友们说的血小板，培养后期一般就会自动裂解死亡

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作者: wjp130    时间: 2012-12-17 11:52

真菌污染会看到菌丝，像杂草一样生长，有时候会看到孢子，

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作者: suning5    时间: 2012-12-17 12:33

第一，如果是污染的话，是葡萄球菌感染，是细菌，而不是真菌。第二，从大小来看，很可能是血小板

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:36

谢谢你们的回答，应该不是污染了，如果是污染的话，细胞早就死亡了。不知道是不是血小板了 因为图1和图2 是第8天照的，前几天没有这种东西。有人说可能是脂滴，像不呢？

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:39

回复 yinfuhua 的帖子7 y' M2 O5 x) ?8 V! D& f

+ _! k8 l& }# G/ X" x7 a4 X谢谢你们的回答，应该不是污染了，如果是污染的话，细胞早就死亡了。不知道是不是血小板了 因为图1和图2 是第8天照的，前几天没有这种东西。有人说可能是脂滴，像不呢？

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-17 22:41

回复 jenvy121 的帖子
& C) O" |0 [: n( b' D
# k& S3 d2 l" l% N1 ?  @怎么低速离心换液啊？离心力多少？洗几次？

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作者: yinfuhua    时间: 2012-12-18 00:00

回复 zhuzhentulip 的帖子8 b, a% I3 o1 L1 Z; S$ Z" U4 U( {

, T* _# Q# T7 J这个亮度确实和脂肪滴（球）的折光度很像。

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作者: bloodroses    时间: 2012-12-18 19:49

看着不像污染，
$ `9 K# [( m" \8 C9 G# g( Q3 G/ Q建议如果重新分离细胞培养时，可以多洗涤两遍，: }2 G# C. b" s: M, A8 k
根据细胞情况，隔天半量换液，这样看起来应该就会干净些的。

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-18 22:10

回复 bloodroses 的帖子
/ B# ?/ v1 j8 l
8 K# W8 h) y7 B- \就是

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-18 22:10

回复 yinfuhua 的帖子3 _& J7 `4 }" b$ s; T
* c; Q7 N: Y- O4 y; P% ~  r" F' x
是的

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作者: bloodroses    时间: 2012-12-18 22:28

8 `3 k2 s) [( w& C
$ {. K0 k3 a6 {8 @3 a
回复 zhuzhentulip 的帖子
: u$ A. @. I& _6 @
3 y; h; W1 c$ Y# ~离心换液时，我是用90g离心5分钟的

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作者: zhanglei1414    时间: 2012-12-19 23:03

污染没污染看培养基颜色和浑浊度就能看出大概

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-20 21:45

回复 zhanglei1414 的帖子
" L; l, _/ R8 S6 p
. x3 o7 X0 I- }细胞数量多了以后培养液隔天就会变黄的啊,也会有颗粒,也是浑的啊

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作者: zhuzhentulip    时间: 2012-12-20 21:45

回复 bloodroses 的帖子/ ?( k% n1 w" u" K8 j2 I

0 u9 g+ {8 {2 t8 Q# O: J* g! N; T4 v2 }+ z那转速只有100多了,是不是?

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作者: bloodroses    时间: 2012-12-21 19:43

回复 zhuzhentulip 的帖子3 Q4 D0 u1 b$ d: F8 G3 i( B4 c4 D

: ]$ ?/ \7 X4 M; r& @8 X这个要根据离心机的具体情况而定了7 ^, E5 O+ A2 ]+ y  W
如果离心半径比较大，那么转速就低一些。

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作者: xu_shufen    时间: 2012-12-25 07:32

是真菌污染，此种细菌有一个特点，它的生长不影响细胞生长，只有细胞菌长到一定程度时才影响细胞生长，且成串生长类似葡萄状，是真菌的一种酵母菌。你可进一步鉴定。

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作者: kiss2346    时间: 2013-1-7 08:57

个人觉得是血小板可能性很大，前几楼低速离心的建议不错，可以采纳

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作者: easternliu    时间: 2013-1-9 13:46

bloodroses 发表于 2012-12-18 22:28 , x7 L6 I' |3 f! Y' u/ u
回复 zhuzhentulip 的帖子2 e, ~8 M( M& _( N

0 D- m7 D$ [- b& O离心换液时，我是用90g离心5分钟的

# `/ M* C8 ]8 R
CIK细胞这么小，90G？我们都用的600G离心的，这差距太大了吧

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作者: echono    时间: 2013-3-10 22:24

应该不是污染，正常的。放心好了，

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作者: flys100    时间: 2013-3-11 13:51

确定不是污染，目测是杂质，后两个图看起来，质量很差吧。

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作者: 漂泊的风    时间: 2013-3-18 11:23

不是污染，没事的，细胞挺正常的

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作者: realff    时间: 2013-3-29 16:16

回复 zhuzhentulip 的帖子" F' [- a4 B* W( p
/ T8 f7 _" ~% Y3 R6 q
我也认为可能是脂滴哦，以前也为这个怀疑过。当时认为这种杂质来自血清，然后就单独拿加了血清的培养基和空白培养基做对比，都放进培养箱。发现加了血清的培养基逐渐出现杂质，越来越多，检测也没有染菌。同时另一瓶没有出现这种情况，所以我判断很可能是脂滴之类的。

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作者: 雁南飞    时间: 2013-3-29 16:35

是不是脂滴

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作者: hotcell    时间: 2013-3-30 14:28

有可能是支原体或衣原体污染

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作者: zhuzhentulip    时间: 2013-7-9 20:17

回复 realff 的帖子- r/ E, H  D7 x
$ N/ R7 Q' B5 @' e
我也这样认为，加血清的培养基逐渐出现杂质。

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作者: mtdj1314    时间: 2013-12-11 13:50

回复 stang198651 的帖子
8 L: K# U3 y, e$ F* Z/ _; R: |# |/ v2 ~+ b' `7 b
你好，我想问下，CIK早期培养时看到很多黑色，似乎杆状，能动的，是血小板还是污染？培养基颜色变化不明显，轻轻晃有沙状物，显微镜下可见很多比细胞小的杆状物，颜色深，细胞本身透亮，似乎没有受影响。那这是血小板还是污染？

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作者: 孙帅帅    时间: 2013-12-13 14:52

革兰氏染色  能染真菌？

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作者: 星空雾雨    时间: 2013-12-27 15:21

回复 easternliu 的帖子7 |8 m+ o; w: C0 F

3 y! h' ?3 ^7 ?5 Y8 b+ L6 x' U1 [( i不是用2000rpm的转速吗    差距这么大吗  你们的转速是多少

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作者: easternliu    时间: 2013-12-30 09:48

星空雾雨 发表于 2013-12-27 15:21
" U; {$ y5 _* ]/ t回复 easternliu 的帖子
; S% R4 v! p5 _% K# G- M- L5 @0 p* r2 G# v, v- o4 x
不是用2000rpm的转速吗    差距这么大吗  你们的转速是多少

2 W  a. J; V# J不同离心机讲转速是没意义的，离心力是转速和半径两个因素决定的，同样的2000rpm，在你那儿可能是400g，在我这儿是700g，所以和别人交流的时候，我们一般不说RPM。之前我说错了，我们离心一般是 300g，10min。

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作者: zhuzhentulip    时间: 2014-5-31 00:16

回复 孙帅帅 的帖子( N/ T# L- D* T% ~. v5 t, K

2 O& m# o0 S8 v0 G; a5 d/ o革兰氏染色当然可以染真菌了 真菌为紫色 革兰阳性

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作者: zhuzhentulip    时间: 2014-5-31 00:17

回复 星空雾雨 的帖子
& J7 ^  u- G+ U  D! a
, q) p7 k$ T" X6 f要看相对离心力 离心机不同 相对离心力也不同 分单核细胞的时候我们用的离心力是600g

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作者: yj729506    时间: 2015-11-9 13:37

请问你的这个情况解决了吗？

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作者: zhengjianwei521    时间: 2015-11-9 14:55

应怪不是，你这是刚培养的吧

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