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标题: 求教磷酸钙转染 [打印本页]

作者: Dongqin11 时间: 2012-12-19 16:41 标题: 求教磷酸钙转染

实验室最近需要用到磷酸钙转染的方法，无奈重复性很差。想着有一点可能是用的氯化钙不行，我们实验室用的是国药的二水磷酸钙。想问问熟悉的人能不能告知得到较好的转染效率用哪种氯化钙。

作者: rexhz 时间: 2012-12-19 21:57

药品都要用sigma的细胞培养级的。关键不在于氯化钙，问题应该出在HEPES缓冲液上面，HEPES缓冲液对PH要求很严格

作者: hwlightning 时间: 2012-12-20 09:01

磷酸钙转染有两个最重要的两点：1.HEPES缓冲液的PH值 2.细胞的状态，百分之七八十的时候转最好，做这个实验之前应该先刷选细胞种子，把优良的种子多冻存些。如果是转染293细胞，20代左右的细胞转染效率会高些。细胞得状态非常重要，准备大批量包装前先做几皿GFP看看荧光效率。

作者: hwlightning 时间: 2012-12-20 09:03

氯化钙我们也是用的sigma的

作者: Dongqin11 时间: 2012-12-20 11:38

回复 hwlightning 的帖子1 {* x- Y* k$ }% g
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谢谢

作者: chentian820 时间: 2012-12-20 12:28

氯化钙不要用国产的。偶上次用国产的，配制的溶液都是灰色的。sigma的就好很多了。我们买的是sigma的六水合氯化钙。

作者: 碧落 时间: 2012-12-22 00:19

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。) G' h: C( V/ H* E7 O
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了

作者: 碧落 时间: 2012-12-22 00:19

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。6 B% g: ]8 ?* V4 K' v* w- e5 ~; q
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。1 y8 i% t9 H) H [7 @/ x$ a
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了

作者: 碧落 时间: 2012-12-22 00:19

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。- Y& h% J: g( e
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了

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