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标题: 分离小鼠脂肪干细胞和成熟脂肪细胞，上层的白色漂浮层是不是成熟的脂肪细胞？ [打印本页]

作者: pxw514477866 时间: 2012-12-21 10:29 标题: 分离小鼠脂肪干细胞和成熟脂肪细胞，上层的白色漂浮层是不是成熟的脂肪细胞？

分离小鼠的成熟脂肪细胞和脂肪干细胞，发现消化过滤后，1500rpm，5min后上层有一层白色的漂浮物，不知道是不是成熟的脂肪细胞？下层的白色沉淀重悬之后直接接种到细胞瓶，没有贴壁的细胞。而上层的白色细胞层吸出来之后再离心纯化2遍，最后观察得到的脂肪细胞很少，不知道怎么回事？按理说脂肪组织分离成熟脂肪细胞很容易，会得到很多细胞，但是我分离之后发现成熟脂肪细胞很少，不知道是哪个环节出了问题？高手们给点建议！

作者: 相宜 时间: 2012-12-22 10:20

个人拙见：1 下层的白色沉淀没有获得理论中的细胞---消化酶的问题。胶原酶消化不彻底。
2 上层的白色物质就不好说了，有可能是脂肪细胞，也有可能是没有消化彻底的筋膜或者其他杂质。6 z* {# a$ E3 j6 |8 T- `
建议：消化酶的温度、摇床速率和消化时间都要重新设计，直至消化完全。

作者: pxw514477866 时间: 2012-12-24 15:17

消化后加培养基混匀，过200目细胞筛的，下层白色沉淀接种后发现有很多脂肪细胞，前一次分SV细胞分出来了，但是这一次没分出来，很是让人郁闷啊

作者: liyujuanmarry 时间: 2012-12-28 16:08

1 脂肪加入胶原酶后建议用200rpm/min的恒温振荡仪充分消化；
2 消化离心后保留管底的白色沉淀（SVF细胞或其他组织）；
3 将沉淀重悬后用100um无菌滤器过滤掉其他杂质；# z3 y# a% B$ M! K, |
4 接种细胞，定时换液、传代，相信细胞一定能长得很不错

作者: pxw514477866 时间: 2012-12-28 16:24

回复相宜的帖子
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这两天又分了一次，发现上层漂浮物后来过了400目细胞筛之后就没有，个人感觉好像是筋膜或者小的组织块，我要分ADSC，也要分上层的成熟脂肪细胞，感觉成熟脂肪细胞比ADSC还难分

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