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标题: 细胞复苏的疑问 [打印本页]

作者: huangcong1988 时间: 2013-1-2 16:01 标题: 细胞复苏的疑问

现在细胞越来越娇贵了，以前细胞冻存用40%FBS,10%DMSO,50%DMEM就能配冻存液，而且复苏很容易存活，复苏用10%血清基本上复苏能存活75%以上，而且两天内就能长满传代，以前冻存细胞没有冻存盒，都是用棉花包着，然后直接扔到﹣80。现在冻存液为90%FBS，10%DMSO，复苏时候用15%血清（有时候用含双抗的），复苏长了很久都没长起来，而且细胞老漂，细胞复苏的话，基本只能存活10%，另外最主要的是现在都用冻存盒冻存细胞，到底咋回事啊？

作者: yuhaoze 时间: 2013-1-2 18:54

支原体，看看有没有支原体感染。再就是，我以前用90fbs+10DMSo的配方，复苏率很低，现在不用那么高的血清了，都加一点DF12.

作者: MEMO2012 时间: 2013-1-2 19:52

原来血清浓度太高也不好

作者: huangcong1988 时间: 2013-1-3 13:11

回复 yuhaoze 的帖子
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行，那我试试降低血清浓度，按理是血清浓度越高越好吧？

作者: huangcong1988 时间: 2013-1-3 13:12

回复 yuhaoze 的帖子8 K4 r2 D; I" j% N+ [

加多少D/F12?

作者: yuhaoze 时间: 2013-1-3 13:53

回复 huangcong1988 的帖子
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我现在用40%

作者: xu_shufen 时间: 2013-1-4 07:54

细胞冻存效果好坏取决冻存细胞的状态、DMSO毒性，细胞冻存时最好处在对数生长期，DMSO是一种渗透性保护剂，分子量小，渗透快，在温度高时对细胞毒性大，调整冻存的方法。

作者: wang3033 时间: 2013-1-4 08:44

用20%FFBS,10%DMSO，70%高糖DMEM试一试，应该没有问题的

作者: 雪国叶子 时间: 2013-1-4 16:05

我认为和冻存液的成分关系不大，主要是你冻的第二批的细胞细胞状态可能不好

作者: 小时候就很酷 时间: 2013-1-5 19:15

细胞复苏时间和水温的温度很关键，最好把细胞从液氮拿出来以后，直接投放到38度左右的温水里。细胞从液氮拿出后不能在室温暴露时间过长，最好别过1分钟。

作者: 469787350 时间: 2013-1-7 09:27

FBS的浓度不必那么高，50%的FBS，10%的DMSO，40%的DMEM，效果就不错，然后就是在复苏的时候一定要快，千万不要犹犹豫豫。

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