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标题: 大家收RNA样品时都是怎么裂EB球的 [打印本页]

作者: 不倒翁 时间: 2013-1-2 19:19 标题: 大家收RNA样品时都是怎么裂EB球的

最近在收一些EB分化的RNA样品，发现到后面的天数，d6，d8，d10的时候，随着EB球的长大，裂RNA越来越难了，有时候加入Trizol后几个小时还是可以看见细胞团在里面。加上之后我也会吹一吹，然后裂的过程中晃一晃，还是不行。请问大家都是怎么操作的？望有经验的人士不吝赐教，多谢！

作者: yueweilei 时间: 2013-1-2 19:47

貌似可以贴壁处理后再提。

作者: yueweilei 时间: 2013-1-2 19:48

貌似可以贴壁处理后再提。

作者: haijing12585 时间: 2013-1-3 21:12

回复不倒翁的帖子
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震荡一下不可以吗？

作者: chentian820 时间: 2013-1-4 15:55

在加trizol之前一定要PBS洗，出去培养基里面的蛋白。然后就是trizol多一点，加了之后用振荡器震荡。效果不错的。

作者: 不倒翁 时间: 2013-1-4 16:18

回复 yueweilei 的帖子; C4 S0 p# f0 Y% k
" G0 n6 T+ A- _
你那个不是正常的EB吧铁壁处理的话需要多少时间呢

作者: 不倒翁 时间: 2013-1-4 16:18

回复 yueweilei 的帖子% L, q! K0 N8 Y9 {/ K
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你那个不是正常的EB吧铁壁处理的话需要多少时间呢

作者: 不倒翁 时间: 2013-1-4 16:20

回复 chentian820 的帖子

多谢多谢我以前都没有洗 EB球小的时候没有问题大了就不行了震荡会不会剧烈了点？提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长要不然会有基因组DNA污染呢

作者: 不倒翁 时间: 2013-1-4 16:21

回复 haijing12585 的帖子

不知道会不会剧烈了点？提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长要不然会有基因组DNA污染呢我一般都是拿枪吹一会，放置的时候有时候拿起来晃一晃，但是后面的天数效果还是不好

作者: yueweilei 时间: 2013-1-4 17:58

回复不倒翁的帖子1 z( v7 r6 E L9 t& }+ R' n
1 U4 m( c* Y9 U: l
d8-d9时的EB，换个容易贴壁的皿，第二天就能看到贴好了。不过不知道你的情况适不适用！

作者: haijing12585 时间: 2013-1-4 21:18

回复不倒翁的帖子9 P3 y" [) C6 a8 H3 T$ N# g4 ~
1 X9 W0 W3 S# P
可以先震荡一下，再裂解

作者: kalaka 时间: 2013-1-8 12:34

多吹吹(20次) , vortex下

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