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标题: 外周血CIK培养--死亡 [打印本页]

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-4 17:01 标题: 外周血CIK培养--死亡

最近做了两次外周血的CIK，每次都是刚开始几天出现大的集落，然后不到一周的时间细胞就开始死亡，视野内全是各种碎片及没有光泽的黑暗的小个细胞，有的还不是细胞，不知道是什么原因。坛子里有没有遇到过这种情况，因为以前同样的方案养脐带血来源的CIK效果很好，不知道外周血的是怎么回事。大家帮忙分析一下，谢谢。

作者: 流泪的鱼 时间: 2013-1-5 09:11

第三天开始要补充培养基和细胞因子，你补充了吗？二氧化碳是新换的吗？水池里是否有水？细胞因子是新批次吗？培养基的种类？和以前的完全一样吗？病人的血液做了化验了吗？是同一批次的培养皿和培养袋吗？诸多问题要一一排除。

作者: gengtongyu521 时间: 2013-1-5 13:43

我做外周血的时候细胞经常会成团，大片大片的团，单个细胞很少，每天做实验前要晃一晃培养液，使细胞分散开，充分接触到营养，并适当补充培养基。

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-5 13:53

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所有的条件都和脐血的一样，按时补加培养液和细胞因子，甚至脐血和外周血同时做的时候也是外周血的长的不好，就出现这种情况，而脐血的长的很好。用的外周血不是病人的，是抽的我们自己的血液，健康身体的。想问下，外周血和脐血的培养方案是不是不太一样？还是因子的量问题？

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-5 13:54

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嗯是的，聚团现象很严重，但是到后期就会消失都是单个的细胞了。想问阁下你们的细胞因子是怎么加的，第一次是加IL-1、IL-2和CD3吧，以后每次换液的时候只补加IL-2吗？因子用量是1000U吗？

作者: xu_shufen 时间: 2013-1-6 07:38

cik细胞培养是指多种细胞因子激活淋巴细胞，使细胞活化、增殖。血液中的其它非淋巴细胞在大约4-5天时逐渐死亡。培养14天以后死亡的细胞被吞噬。所以培养时细胞浓度非常重要，浓度太低细胞长的慢，死细胞多，这样死细胞的代谢物质影响细胞生长。另外，自体CIK细胞个体差异很大，对于高血压、糖尿病病人CIK细胞不易培养，要极时观察加入细胞因子、血清等物质。

作者: gengtongyu521 时间: 2013-1-6 22:29

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第一天先加IFN-r的。第二天再加那三种

作者: kiss2346 时间: 2013-1-7 08:20

你可以做一下无菌检测，还有我个人感觉脐带血的体系养外周血问题不大，最多就是增值速率有些诧异，但是你这个情况真说不准

作者: sunny.yc 时间: 2013-1-10 13:46

培养基的颜色正常吗？有可能是培养箱CO2的浓度，这种问题我遇到过

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-11 11:00

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是正常的，条件都是正常的，一起培养的脐血的CIK也很好，就是外周血的长的不行。请问你们是怎么解决这个问题的？

作者: sunny.yc 时间: 2013-1-11 12:36

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不知道你们是否添加了自体血浆，如果聚团非常厉害的话，建议换个人的试一下，而且添加点的细胞因子和培养基是否合理呢？

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-14 09:11

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没有加自体血浆，是用的胎牛血清，其实问题不是聚团，而是本应该处于增殖的阶段细胞却死了，细胞因子和培养基都是合理的。

作者: easternliu 时间: 2013-1-14 09:21

貌似没人能解决楼主的问题。现实是用养脐血CIK的方法用到外周血是没问题的，细胞形成集落也是没问题的，适当吹打。细胞因子容易过期，这个你查一下。然后就是细节问题了，只有你懂的。

作者: sunny.yc 时间: 2013-1-14 09:43

回复莫邪小仙的帖子8 R+ [1 K1 a1 v" D

那确实很奇怪了，培养基建议用PAA或者551，建议用自体血浆，主要是安全

作者: liutianhua 时间: 2013-1-19 17:58

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你是做的正常人的外周血还是病人的，如果是病人的，你查一下病例看看他上次的化疗等其他治疗是什么时间做的，操成细胞死亡的原因会有很多，不一定是工艺的问题。

作者: 莫邪小仙 时间: 2013-1-21 10:57

回复 liutianhua 的帖子4 [- R! f0 T0 h9 d) v& J
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是正常人的啊，抽的我们同事自己的血

作者: kiss2346 时间: 2013-1-21 16:30

好像在论坛里见过这个情况，个人感觉外周血增殖能力较脐血差很多，同样体系外周血增殖效率也差很多，没有光泽的黑暗的小个细胞是血小板的可能性较大，你最好把详细的条件都写出来，让大家帮忙分析分析

作者: liutianhua 时间: 2013-1-21 18:04

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你是通过什么判断细胞死亡的呢？台盼蓝染色吗？细胞活化了如果后续营养没有跟上的话，很容易死亡的，这后续营养不仅仅是培养基、血清和细胞因子这么简单的。外周血和脐血的生物学性质不一样，像你这种情况最好找个有经验的人做一下指导。

作者: lyj-0017 时间: 2013-6-26 13:14

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我们现在也遇到了你说的这个问题，不知道你们现在这个问题解决了没有？是如何解决的呢？谢谢

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