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标题: 接种密度的问题 [打印本页]

作者: xuanxuan2121 时间: 2013-1-9 18:00 标题: 接种密度的问题

每次消化完，接种密度都不能有效掌握，计数又觉得费事。请问你们各种T25\T75\10cm dish等培养器具你们的接种密度一般是多少呢，我指的是干细胞的接种密度。。

作者: 流泪的鱼 时间: 2013-1-9 19:40

培养细胞就是个麻烦的事，不能怕麻烦，我们就是人工计数。现在也有了细胞计数仪，大约3-4万一台，不愿意费事可以买一台。但是所有的误差都在10-20%之间，所以你衡量一下。

作者: yuhaoze 时间: 2013-1-9 20:56

本帖最后由 yuhaoze 于 2013-1-9 20:57 编辑 ! N- c' `$ F$ C) L' D' g! \
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什么干细胞？成体干还是胚胎干？
胚胎干你怎么计数呢? 只能来个大致的1传几吧. ?- ~& ^! l3 X( C
成体干还是最好计数吧，a simple blood cell counting chamber will do，花不了你几分钟时间。2 b& S: W' C9 a" K
我现在养293T每次传代的时候都计数呢，就是为了严格控制时间，也会知道细胞是长得快了还是长得慢了，状态怎么样，适合不适合做实验等等* b" {. S3 |; M2 F
希望对你有帮助，同意楼上的观点。做实验不要怕麻烦，只要对实验有帮助，就去做。

作者: weirenrong 时间: 2013-12-17 18:49

看看

作者: 18605313076 时间: 2014-1-14 15:29

最好计数吧，我们每次消化完都计数，不然肉眼误差太大。细胞接种密度不能太密，根据细胞的倍增时间计算，等再次消化处理时细胞密度可以达到80%左右较好。细胞处理时也需要密度达到70~80%左右，太密的话细胞活力会下降，重新接种后细胞容易老化和死亡。

作者: jojo1988509 时间: 2014-1-15 14:45

不知道你在说什么干细胞。这个没有统一的标准啊，自己的细胞看自己养的情况来，有的细胞长得相当快，你就传少点多传几皿，有的长得慢又不好，1比1的又再传代都可以啊，你看着细胞状态，千万不要整的太密或者长老了就行啊。

作者: zm19900508 时间: 2014-1-16 15:31

回复 yuhaoze 的帖子/ X5 i( T7 y0 d& |* |0 ^: q

293也要计数啊，真心嫌麻烦啊。我们都是隔天分，一比三或者一比四，基本固定不变，觉得挺好的

作者: yuhaoze 时间: 2014-1-16 19:26

回复 zm19900508 的帖子
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作者: wf78365421 时间: 2014-1-18 10:11

不用严格计数，按照一比三或者一比四，基本固定不变，细胞长的很好. o x& _- g0 y+ C% M

作者: lizzy_81 时间: 2014-2-10 17:46

不同的细胞接种密度都不一样啊。只能多查查文献，然后自己做些条件摸索。传代的话，一般1:4左右，最好细胞融合达90%传代

作者: 孙帅帅 时间: 2014-2-13 09:02

关键是看你养的什么细胞，楼上说的对，ES没法计数，是看细胞克隆团的密度来确定传几个板，传代太稀细胞张不动，传代太密容易接触抑制，影响下一代生长；像间充质干细胞传代时就需要计数！

作者: swtarron 时间: 2014-2-13 13:31

这个肯定要计数（计数都有误差，何况没有计数），计数后才能掌握好接种的密度，这样后面的传代和冻存才好掌握，要不然细胞不是老化就是细胞数不够。

作者: 加菲菲 时间: 2014-2-13 21:07

这些都是经验值，要根据具体需要的细胞量来决定吧。还有具体是何种干细胞也没有说清楚呀，每种细胞具体增殖周期应该都不一样的吧。如果是养ips基本是1:3，两天就传一次代了。

作者: rainwu 时间: 2014-2-15 10:43

作者: rainwu 时间: 2014-2-15 10:45

我们用的就是这种，还好误差不大

图片附件: 408_G_1369345147384.jpg (2014-2-15 10:45, 4.85 KB) / 下载次数 145
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NTkwOTV8M2IwYTIyOWN8MTc0ODY1ODk0MHww

作者: luyue6453 时间: 2014-2-15 14:15

回复 xuanxuan2121 的帖子2 T/ j5 y1 `7 G z" t \- G

1ml培养液4000个细胞。

作者: yanwu_1 时间: 2014-2-15 18:00

看细胞融合度吧，80%左右按1：3就可以。如果100%融合，1：4也行。建议不要让细胞完全铺满瓶子，对细胞状态有一定影响，容易引起细胞老化或分化。

作者: nines 时间: 2014-2-17 16:20

最好还是计数，保证每次传的密度相同或近似，之前我传细胞，密度时高时低，细胞状态不稳定，影响实验结果稳定性，后来统一密度后就好很多。还有一个问题提出来，有时传代的时候，比如一瓶传三瓶，这三瓶细胞会有一瓶细胞长的很慢或是不长，遇到好几次了，不知道怎么回事，有没有遇到同样问题的？

作者: 细胞海洋 时间: 2014-2-18 09:58

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