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标题: Western实验求助 [打印本页]

作者: amphioxus 时间: 2013-1-13 17:19 标题: Western实验求助

本人刚学做Western blot ，最近订了一个抗体Anti-DYNC1H1 antibody（ab99500）abcam公司。但说明书上无蛋白分子量大小，abcam共识网上也查不着，求高人帮忙查一下该蛋白的分子量。+ T* U2 ~9 f$ Q- Q9 y
另外，曝光的片子上蛋白质与说明书上蛋白有10Kd大小的差异正常吗？还是说必须与说明书上一致才是目的带？

作者: goast8 时间: 2013-1-14 09:58

这个分子量与你的检测蛋白有关，与抗体说明书上的大小无关。2 P4 g, a" E+ M9 Q: @1 m2 z
看你的目标检测蛋白是什么样的状态，与说明书上原蛋白大小不一致有很多可能原因。总体来说，特异性没问题，就没问题。
同时，你要自己预测下你的目标蛋白分子量的大小。

作者: amphioxus 时间: 2013-1-14 17:40

我想问的就是检测的蛋白分子量是多大，这个在一般的说明书上应该有标的，但是我买的这个上面没有写。怎么查要检测的蛋白分子量啊，不知道的话就不好剪膜呀？

作者: franklinhg 时间: 2013-1-14 20:18

自己在NCBI去查就可以啊你查CDS区有多少个碱基然后再除以3 得到大概的氨基酸的数目然后乘以110或者120 所得的数值基本就是没有修饰的蛋白的理论上的分子量了。但是真核生物的蛋白在翻译后有可能有各种修饰的，比如磷酸化，乙酰化等，所以分子量会和理论上的有所差别。

作者: weiyepan 时间: 2013-1-15 02:38

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自己要做的蛋白都不知道多大，你实验怎么设计的。。。你这不应该在论坛上问，应该和设计实验的人问清楚，谁知道你蛋白表达什么情况，有什么标签。

作者: daviddow 时间: 2013-1-20 22:27

整个膜都做就可以发现是多少了

作者: 461650833 时间: 2013-1-23 10:04

最好还是查下你做的蛋白是多大的分子量要不你实验无法往下做啊耽误事啊

作者: hbs08230 时间: 2013-6-19 12:56

做一次预实验，浓度梯度上样品，从特浓到特淡。跑胶时让loading dye 到底，PVDF膜剪大一点上层胶下层胶都transfer过来。等曝出来就知道蛋白位置了，顺便还知道合适的上样量了。

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