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标题: 关于细胞周期时长检测 [打印本页]

作者: Sakya 时间: 2013-1-17 14:06 标题: 关于细胞周期时长检测

各位大侠，如果我想检测某种组织细胞细胞周期G1，S，G2，M四个期以及整个细胞周期的时间长度，请问需要采用什么实验技术？

作者: knowtumor 时间: 2013-1-17 20:53

经典的方法是，H3-TDR一次性标记，定时连续取材。制备切片，放射自显影。计数被标记的有丝分裂像的百分数。连续作图便可计算出。

FACS不能测。

作者: Sakya 时间: 2013-1-18 12:42

好弄吗？用核素标记核苷酸？

作者: knowtumor 时间: 2013-1-18 14:35

80年代和90年代初的时候H3-TDR还很多人用。现在恐怕没人用了，谁还卖？

作者: Sakya 时间: 2013-1-18 17:09

现在人们用什么方法检测细胞周期时长呢？？？

作者: knowtumor 时间: 2013-1-18 21:04

It is a lost art.

作者: Sakya 时间: 2013-1-18 22:56

楼上能帮我设计一个简易的测定细胞周期时长的方法吗？

作者: knowtumor 时间: 2013-1-19 08:14

H3-Thymidine 可用BrdU取代。
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比如小鼠肿瘤，一次性注射BrdU,间断取材。30 min, 1hr, 2h, 4h, 6hr,12 hr,24h, 48hr, 96h; 肿瘤的细胞周期偏长，一般在20-100hr。有超过100hr的。

将各标本制备石蜡切片，免疫组化做BrdU染色。计算Mitotic figure中BrdU的阳性率。做动态曲线图，可计算出。# y* b0 c+ }- ~( U( A h

作者: Sakya 时间: 2013-1-19 09:42

thanks

作者: Sakya 时间: 2013-1-19 09:51

能不能把现在的流式细胞仪改进一下，让它可以测定细胞周期各期时间长度？

作者: knowtumor 时间: 2013-1-20 10:51

一次测定肯定不成。所以，不是机器本身的问题，而是实验设计的问题。巧妙构思，将现有的技术方法结合起来，也应该可以测。

问题是，当你的结果与现有的观点不一致时，你会遇到大麻烦。
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说白马是马的论文，你可以去数白马有多少根白毛，这被认为是好论文，容易发表，起码没有政治错误。“红学”研究，就有数大观园中多少厕所的。* V3 C, R% O5 |% F4 U+ K8 y! T4 [0 H

说“白马非马”的论文，无论论证再严密，很难发表。但是，说白马是马的人，历史永远记不住他。而说白马非马的人，历史却忘不了。/ L0 F. `4 W# _- S$ z) b9 a( B2 J
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100人中，当99人都说是白马，说是黑马的人即便对也是错。因为他对了，99人就是错的。民主社会，99比1啊！
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“假到真时真也假”。大家还记得去年在这个论坛上讨论的Nature Mar 28，2012的文章。世界著名实验室发表在著名杂志的约90%的肿瘤临床前研究的关键性结果重复不出来。更有意思的是，在IF6-19这一档次的杂志中，重复不出的论文的被索引率远高于可被重复的论文（169:13）。其推论就是这句红楼梦中的名言。% n) b) m$ T/ m! h4 G6 ]3 a
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哈佛大学的某任校长有句给本科生的忠告，“教科书中50%的内容可能是错误的。只是我们不知道是哪50%". 这位校长的话，有人说是至理名言，有人说是搞科研的老油条。
哲学上，没有否定，就没有进步。

作者: hanyl 时间: 2013-1-20 18:14

记得翟中和主编的《细胞生物学》一书中提到两种方法，你可以看看。

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