干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
染S100 和 GFAP的小问题
[打印本页]
作者:
等待feng
时间:
2013-1-25 23:40
标题:
染S100 和 GFAP的小问题
各位大仙 我前几天染免疫荧光，骨髓干干细胞诱导的，S100能染出来 但GFAP没染出来，能说名我诱导的是雪旺细胞吗？？求助啊 各位。。。实在是迷茫
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 08:06
标题:
回:染S100 和 GFAP的小问题
6 _! k: z$ a# X3 X* T. n
这程子老回复不了跟帖，只好重起页了。
% I8 C2 p$ H& {, q
你是俩搁一块染不上呀？还是分着单染也染不上？
作者:
等待feng
时间:
2013-1-26 09:46
回复
dianying
的帖子
" {# x3 ]; D9 K" H- j1 I
( G' A; | A& y) m3 f8 P' ~5 s H
分别染得，哥们。。只染上了S100没有染色GFAP
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 15:17
回复
等待feng
的帖子
* X0 d) m5 |- N. C( i) @' t+ C* z6 Z
( y8 h8 n# \. Y0 B( t
你的二抗买了多久了？是不是过期了？
. g" l% b. A+ \" M8 n/ u' Z" J
gFAP是抗兔的还是鼠的？用的什么blocking?
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 15:17
回复
等待feng
的帖子
4 `: |5 x" W. N
' c: x o3 S0 H* U& Y
你的二抗买了多久了？是不是过期了？
* ?, M D; A) ]4 d% y1 j
gFAP是抗兔的还是鼠的？用的什么blocking?
作者:
huangcong1988
时间:
2013-1-26 17:19
步骤？
# o/ A6 W* X" s
作者:
huangcong1988
时间:
2013-1-26 17:19
你的免疫荧光步骤呢？
作者:
guofei5821
时间:
2013-1-26 18:50
不知道你二抗是否用对
作者:
细胞海洋
时间:
2013-1-26 22:26
回复
dianying
的帖子
+ U3 ]- b! N1 J6 J6 o' E, o0 X E
9 s. @3 x" X1 J8 d3 T# Q
用的什么浏览器 提示什么 可以联系我的qq 572776999 我查一下什么原因
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:19
回复
dianying
的帖子
( C3 Z; o: q/ Z7 r9 ?
a& {, \4 N% v3 r+ Y+ I
二抗 应该没错 都是用的抗兔的 FITC 也没过期 十二月刚配的
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:21
回复
huangcong1988
的帖子
: u N% \5 ?- {0 U \
& u/ e, o# ?/ Z: u1 B# w# d: C. K
步骤就是 PBS洗三遍 多聚甲醛固定30分 再洗三遍 加打孔的 然后再洗三遍 加一抗 4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍 加二抗，然后再三十七度一小时 然后PBS三遍 封片嘛 大家应该都这样做的啊
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:26
回复
guofei5821
的帖子
6 M$ j$ C6 ~( x% {3 d2 A
% ]4 K* \9 k3 D1 [1 P
应该没问题 用时细心的看了
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:04
回复
等待feng
的帖子
$ s1 x6 D: i4 _5 N( T% N, o) L
7 }) t7 S, o+ w, a4 m% x( @6 D0 i
你还是先分着染，S100很容易染，先放放。
; X& {+ \* W' y$ Y; _. T
染gFAP:
( _. v8 w4 Z$ A% ]
1)你固定的时间15分钟就可以；
, m3 P9 U9 [/ P
2)你的步骤里没有封闭
5 U: V# m: r7 S: J. @+ q0 M8 \
你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。
' @: _8 \1 O2 M7 Q4 @! B5 ^
我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:10
回复
细胞海洋
的帖子
- ~- D' A' j% S, C# u, j
, L) l6 r2 N1 j2 B3 e5 d6 `8 Y
谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。
s, G7 f6 D' V
非常感谢！
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:18
回复
等待feng
的帖子
; _0 ^0 J# Y1 R% L
& G6 F2 p0 d, ~
也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做...
' H" t$ E9 E+ ^; d! j0 ?
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 17:29
回复
dianying
的帖子
$ q) G0 u( V2 x
6 [# i- c; O* b$ E6 A0 U- }! Q+ F- K
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的 但要稀释嘛
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 17:30
回复
dianying
的帖子
_( @" _) ~6 ^
" F. o* y( g0 k) L( {6 W0 t
你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。
作者:
dianying
时间:
2013-1-28 11:26
回复
等待feng
的帖子
l5 P: ]' s9 p2 X8 |
( S3 }$ S% O3 y, o, g% P% ]. U
你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。
作者:
dianying
时间:
2013-1-28 11:28
回复
等待feng
的帖子
3 w+ x- E K5 }
& ]8 Q8 T7 s% [) S( j
你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5
' H" t$ E9 E+ ^; d! j0 ?