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标题: 转基因小鼠制备实验方法 [打印本页]

作者: defu 时间: 2013-2-18 01:19 标题: 转基因小鼠制备实验方法

1、选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。, O+ B7 t8 e5 \) v% T( S6 J

2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。
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3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。

4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。

5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。+ g" U+ ~6 W- d& O# Y$ R
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6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。* @% g  b' N& I6 l$ ], C

7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。

8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37C0培养箱培养。* ]  T. Y# S; O; [# c0 I2 T! E7 Z
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9、将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g，腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2，吸一个气泡，然后吸取受精卵，尽量紧密排列，再吸一段液体，吸一个气泡，再吸一段液体，共四段液体三个气泡。除较长的那段液体，其余的液体大致1cm左右，气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入，看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔，缝合肌肉和皮肤。

10、受体每隔一个星期称体重一次，当第二次比第一次称重增加时，即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩，待仔鼠3周后，剪耳、编号，剪尾，交分子组检测。
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(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体，此时的小鼠卵数较多，状态较好。用pms诱导卵细胞成熟，用hcg超排。)5 V9 l  V& a, d8 y

作者: 大小年 时间: 2015-6-7 19:59

我想要`~

作者: nauticus 时间: 2015-7-4 21:26

好帖子，要顶！

作者: 榴榴莲 时间: 2015-7-31 11:35

不管你信不信，反正我信

作者: 红旗 时间: 2015-8-10 18:10

说的不错

作者: awen 时间: 2015-8-24 08:01

(*^__^*) 嘻嘻……

作者: 橙味绿茶 时间: 2015-8-27 13:18

严重支持！

作者: biobio 时间: 2015-9-3 08:52

我卷了~~~~~~~

作者: 123456zsz 时间: 2015-9-8 11:10

干细胞从业人员

作者: xuguofeng 时间: 2015-9-13 04:59

呵呵哪天得看看 `~~~~

作者: immail 时间: 2015-9-30 19:17

正好你开咯这样的帖

作者: 依旧随遇而安 时间: 2015-10-21 08:01

(*^__^*) 嘻嘻……

作者: laoli1999 时间: 2015-10-31 20:11

任何的限制，都是从自己的内心开始的。

作者: 大小年 时间: 2015-11-3 17:28

今天临床的资料更新很多呀

作者: 陈晴 时间: 2015-12-23 11:50

不错，看看。

作者: 123456zsz 时间: 2016-1-18 11:34

感謝樓主干细胞之家真的不错

作者: zack 时间: 2016-1-21 11:40

挺专业的，当然现在外面很多公司提供专业的定制服务。

作者: 泡泡鱼 时间: 2016-1-30 19:59

顶顶更健康，越顶吃的越香。

作者: xuguofeng 时间: 2016-2-5 19:12

脂肪干细胞

作者: haha3245 时间: 2016-2-7 09:50

@,@..是什么意思呀？

作者: biobio 时间: 2016-2-14 21:02

宁愿选择放弃，不要放弃选择。

作者: 黄山 时间: 2016-4-10 08:54

加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~

作者: ikiss 时间: 2016-6-30 10:27

我的啦嘿嘿

作者: 苹果天堂 时间: 2016-7-1 10:10

好帖，有才

作者: Kuo 时间: 2016-7-17 10:35

任何的限制，都是从自己的内心开始的。

作者: biodj 时间: 2016-8-18 16:01

希望大家都有好运

作者: 草长莺飞 时间: 2016-8-31 20:52

不是吧

作者: biodj 时间: 2016-9-30 16:01

谢谢分享了!

作者: 旅美学者 时间: 2016-10-15 20:45

今天再看下

作者: wq90 时间: 2016-10-19 20:30

干细胞从业人员

作者: lalala 时间: 2016-10-21 10:43

不早了各位晚安~~~~

作者: 生科院 时间: 2016-11-3 14:42

好贴坏贴，一眼就看出去

作者: 橙味绿茶 时间: 2016-11-11 11:18

不错!

作者: 桦子 时间: 2016-11-26 19:08

支持你加分

作者: 若天涯 时间: 2016-11-28 11:54

加油啊！！！！顶哦!!!!!

作者: na602 时间: 2017-1-3 23:48

加油啊！！！！顶哦!!!!!

作者: DAIMAND 时间: 2017-1-11 12:54

你加油吧

作者: Kuo 时间: 2017-1-24 05:27

晕死也不多加点分

作者: netlover 时间: 2017-2-15 20:43

我仅代表干细胞之家论坛前来支持，感谢楼主！

作者: 365wy 时间: 2017-2-21 20:51

真好。。。。。。。。。

作者: marysyq 时间: 2017-3-4 12:40

也许似乎大概是，然而未必不见得。

作者: 我心飞翔 时间: 2017-3-4 17:24

哈哈瞧你说的~~~

作者: tuting 时间: 2017-3-18 03:22

支持你一下下。。

作者: wq90 时间: 2017-3-29 02:01

顶的就是你

作者: apple0 时间: 2017-4-3 04:04

谢谢分享了!

作者: s06806 时间: 2017-4-16 17:52

宁愿选择放弃，不要放弃选择。

作者: 某某人 时间: 2017-5-8 21:42

帮你项项吧

作者: 小丑的哭泣 时间: 2017-5-19 14:35

好贴子好多啊

作者: dglove 时间: 2017-5-19 19:50

HOHO~~~~~~

作者: myylove 时间: 2017-5-21 10:10

干细胞研究人员的天堂

作者: aliyun 时间: 2017-5-30 20:27

顶顶更健康，越顶吃的越香。

作者: dd赤焰 时间: 2017-6-4 13:54

我来看看！谢谢

作者: nosoho 时间: 2017-6-11 19:26

呵呵哪天得看看 `~~~~

作者: 再来一天 时间: 2017-6-21 08:43

帮你项项吧

作者: frogsays 时间: 2017-6-22 00:01

角膜缘上皮干细胞

作者: 心仪 时间: 2017-6-30 17:32

我是来收集资料滴...

作者: cjms 时间: 2017-7-2 18:43

不错不错.,..我喜欢

作者: 橙味绿茶 时间: 2017-7-12 01:54

不错，看看。

作者: Diary 时间: 2017-7-13 09:27

知道了不错~~~

作者: 甘泉 时间: 2017-7-15 03:47

嘿嘿

作者: happyboy 时间: 2017-7-20 04:59

祝干细胞之家越办越好~~~~~~~~~`

作者: doors 时间: 2017-8-1 08:01

老大,我好崇拜你哟

作者: 三星 时间: 2017-8-2 03:33

干细胞治疗

作者: xiaomage 时间: 2017-8-8 17:35

应该加分

作者: txxxtyq 时间: 2017-8-29 12:48

帮你顶，人还是厚道点好

作者: haha3245 时间: 2017-9-9 20:04

顶一个先

作者: 快乐小郎 时间: 2017-9-10 21:17

嘿嘿......哈哈......呵呵.....哟~呼

作者: xuguofeng 时间: 2017-9-17 15:10

好啊，谢楼主

作者: 丸子 时间: 2017-9-17 22:49

我来看看！谢谢

作者: dypnr 时间: 2017-9-27 08:35

说嘛1~~~想说什么就说什么嘛~~

作者: feixue66 时间: 2017-9-27 22:43

谁能送我几分啊

作者: tuting 时间: 2017-10-1 18:27

好啊，谢楼主

作者: IPS干细胞 时间: 2017-10-7 14:26

太棒了！

作者: 老农爱科学 时间: 2017-10-20 14:36

知道了不错~~~

作者: 舒思 时间: 2017-11-10 17:17

一个人最大的破产是绝望，最大的资产是希望。

作者: Whole 时间: 2017-11-13 21:17

不错不错.,..我喜欢

作者: 我心飞翔 时间: 2017-11-21 05:49

加油啊！！！！顶哦!!!!!支持楼主，支持你~

作者: myylove 时间: 2017-12-1 16:09

我毫不犹豫地把楼主的这个帖子收藏了

作者: biobio 时间: 2017-12-3 07:32

顶也～

作者: 命运的宠儿 时间: 2017-12-13 08:43

鉴定完毕.!

作者: frogsays 时间: 2017-12-23 08:43

家财万贯还得回很多贴哦

作者: leeking 时间: 2018-1-1 08:48

我来看看！谢谢

作者: apple0 时间: 2018-1-1 10:01

细胞治疗行业

作者: 昕昕 时间: 2018-1-3 11:02

加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~

作者: 墨玉 时间: 2018-1-4 09:54

加油啊！！！！顶哦!!!!!支持楼主，支持你~

作者: s06806 时间: 2018-1-5 00:01

怎么就没人拜我为偶像那?? ~

作者: doc2005 时间: 2018-1-12 21:59

又看了一次

作者: 墨玉 时间: 2018-1-23 01:45

活着，以死的姿态……

作者: alwaysniu 时间: 2018-1-28 17:56

不错啊! 一个字牛啊!

作者: popobird 时间: 2018-2-7 05:05

初来乍到，请多多关照。。。

作者: 甘泉 时间: 2018-2-11 20:20

老大,我好崇拜你哟

作者: 依旧随遇而安 时间: 2018-2-20 00:54

不知道说些什么

作者: ikiss 时间: 2018-3-1 06:25

楼主good

作者: 8666sea 时间: 2018-3-4 08:10

哈哈，看的人少，回一下

作者: ladybird 时间: 2018-3-7 20:14

厉害！强~~~~没的说了！

作者: 依旧随遇而安 时间: 2018-3-21 05:41

先顶后看

作者: 我心飞翔 时间: 2018-4-7 16:01

这个站不错！！

作者: lab2010 时间: 2018-4-12 23:11

…没我说话的余地…飘走

作者: 红旗 时间: 2018-4-17 02:03

是楼主原创吗

作者: dglove 时间: 2018-4-24 22:54

对不起，我走错地方了，呵呵

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