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标题:
转基因小鼠制备实验方法
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作者:
defu
时间:
2013-2-18 01:19
标题:
转基因小鼠制备实验方法
1、 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。
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2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。
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3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。
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4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。
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5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。
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6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。
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7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。
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8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37C0培养箱培养。
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9、将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g，腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2，吸一个气泡，然后吸取受精卵，尽量紧密排列，再吸一段液体，吸一个气泡，再吸一段液体，共四段液体三个气泡。除较长的那段液体，其余的液体大致1cm左右，气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入，看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔，缝合肌肉和皮肤。
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10、受体每隔一个星期称体重一次，当第二次比第一次称重增加时，即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩，待仔鼠3周后，剪耳、编号，剪尾，交分子组检测。
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(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体，此时的小鼠卵数较多，状态较好。用pms诱导卵细胞成熟，用hcg超排。)
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作者:
大小年
时间:
2015-6-7 19:59
我想要`~
作者:
nauticus
时间:
2015-7-4 21:26
好帖子，要顶！
作者:
榴榴莲
时间:
2015-7-31 11:35
不管你信不信，反正我信
作者:
红旗
时间:
2015-8-10 18:10
说的不错
作者:
awen
时间:
2015-8-24 08:01
(*^__^*) 嘻嘻……
作者:
橙味绿茶
时间:
2015-8-27 13:18
严重支持！
作者:
biobio
时间:
2015-9-3 08:52
我卷了~~~~~~~
作者:
123456zsz
时间:
2015-9-8 11:10
干细胞从业人员
作者:
xuguofeng
时间:
2015-9-13 04:59
呵呵 哪天得看看 `~~~~
作者:
immail
时间:
2015-9-30 19:17
正好你开咯这样的帖
作者:
依旧随遇而安
时间:
2015-10-21 08:01
(*^__^*) 嘻嘻……
作者:
laoli1999
时间:
2015-10-31 20:11
任何的限制，都是从自己的内心开始的。
作者:
大小年
时间:
2015-11-3 17:28
今天临床的资料更新很多呀
作者:
陈晴
时间:
2015-12-23 11:50
不错，看看。
作者:
123456zsz
时间:
2016-1-18 11:34
感謝樓主 干细胞之家真的不错
作者:
zack
时间:
2016-1-21 11:40
挺专业的，当然现在外面很多公司提供专业的定制服务。
作者:
泡泡鱼
时间:
2016-1-30 19:59
顶顶更健康，越顶吃的越香。
作者:
xuguofeng
时间:
2016-2-5 19:12
脂肪干细胞
作者:
haha3245
时间:
2016-2-7 09:50
@,@..是什么意思呀？
作者:
biobio
时间:
2016-2-14 21:02
宁愿选择放弃，不要放弃选择。
作者:
黄山
时间:
2016-4-10 08:54
加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~
作者:
ikiss
时间:
2016-6-30 10:27
我的啦嘿嘿
作者:
苹果天堂
时间:
2016-7-1 10:10
好帖，有才
作者:
Kuo
时间:
2016-7-17 10:35
任何的限制，都是从自己的内心开始的。
作者:
biodj
时间:
2016-8-18 16:01
希望大家都有好运
作者:
草长莺飞
时间:
2016-8-31 20:52
不是吧
作者:
biodj
时间:
2016-9-30 16:01
谢谢分享了!
作者:
旅美学者
时间:
2016-10-15 20:45
今天再看下
作者:
wq90
时间:
2016-10-19 20:30
干细胞从业人员
作者:
lalala
时间:
2016-10-21 10:43
不早了 各位晚安~~~~
作者:
生科院
时间:
2016-11-3 14:42
好贴坏贴，一眼就看出去
作者:
橙味绿茶
时间:
2016-11-11 11:18
不错!
作者:
桦子
时间:
2016-11-26 19:08
支持你加分
作者:
若天涯
时间:
2016-11-28 11:54
加油啊！！！！顶哦!!!!!
作者:
na602
时间:
2017-1-3 23:48
加油啊！！！！顶哦!!!!!
作者:
DAIMAND
时间:
2017-1-11 12:54
你加油吧
作者:
Kuo
时间:
2017-1-24 05:27
晕死也不多加点分
作者:
netlover
时间:
2017-2-15 20:43
我仅代表干细胞之家论坛前来支持，感谢楼主！
作者:
365wy
时间:
2017-2-21 20:51
真好。。。。。。。。。
作者:
marysyq
时间:
2017-3-4 12:40
也许似乎大概是，然而未必不见得。
作者:
我心飞翔
时间:
2017-3-4 17:24
哈哈 瞧你说的~~~
作者:
tuting
时间:
2017-3-18 03:22
支持你一下下。。
作者:
wq90
时间:
2017-3-29 02:01
顶的就是你
作者:
apple0
时间:
2017-4-3 04:04
谢谢分享了!
作者:
s06806
时间:
2017-4-16 17:52
宁愿选择放弃，不要放弃选择。
作者:
某某人
时间:
2017-5-8 21:42
帮你项项吧
作者:
小丑的哭泣
时间:
2017-5-19 14:35
好贴子好多啊
作者:
dglove
时间:
2017-5-19 19:50
HOHO~~~~~~
作者:
myylove
时间:
2017-5-21 10:10
干细胞研究人员的天堂
作者:
aliyun
时间:
2017-5-30 20:27
顶顶更健康，越顶吃的越香。
作者:
dd赤焰
时间:
2017-6-4 13:54
我来看看！谢谢
作者:
nosoho
时间:
2017-6-11 19:26
呵呵 哪天得看看 `~~~~
作者:
再来一天
时间:
2017-6-21 08:43
帮你项项吧
作者:
frogsays
时间:
2017-6-22 00:01
角膜缘上皮干细胞
作者:
心仪
时间:
2017-6-30 17:32
我是来收集资料滴...
作者:
cjms
时间:
2017-7-2 18:43
不错不错.,..我喜欢
作者:
橙味绿茶
时间:
2017-7-12 01:54
不错，看看。
作者:
Diary
时间:
2017-7-13 09:27
知道了 不错~~~
作者:
甘泉
时间:
2017-7-15 03:47
嘿嘿
作者:
happyboy
时间:
2017-7-20 04:59
祝干细胞之家 越办越好~~~~~~~~~`
作者:
doors
时间:
2017-8-1 08:01
老大,我好崇拜你哟
作者:
三星
时间:
2017-8-2 03:33
干细胞治疗
作者:
xiaomage
时间:
2017-8-8 17:35
应该加分
作者:
txxxtyq
时间:
2017-8-29 12:48
帮你顶，人还是厚道点好
作者:
haha3245
时间:
2017-9-9 20:04
顶一个先
作者:
快乐小郎
时间:
2017-9-10 21:17
嘿嘿......哈哈......呵呵.....哟~呼
作者:
xuguofeng
时间:
2017-9-17 15:10
好啊，谢楼主
作者:
丸子
时间:
2017-9-17 22:49
我来看看！谢谢
作者:
dypnr
时间:
2017-9-27 08:35
说嘛1~~~想说什么就说什么嘛~~
作者:
feixue66
时间:
2017-9-27 22:43
谁能送我几分啊
作者:
tuting
时间:
2017-10-1 18:27
好啊，谢楼主
作者:
IPS干细胞
时间:
2017-10-7 14:26
太棒了！
作者:
老农爱科学
时间:
2017-10-20 14:36
知道了 不错~~~
作者:
舒思
时间:
2017-11-10 17:17
一个人最大的破产是绝望，最大的资产是希望。
作者:
Whole
时间:
2017-11-13 21:17
不错不错.,..我喜欢
作者:
我心飞翔
时间:
2017-11-21 05:49
加油啊！！！！顶哦!!!!!支持楼主，支持你~
作者:
myylove
时间:
2017-12-1 16:09
我毫不犹豫地把楼主的这个帖子收藏了
作者:
biobio
时间:
2017-12-3 07:32
顶也～
作者:
命运的宠儿
时间:
2017-12-13 08:43
鉴定完毕.!
作者:
frogsays
时间:
2017-12-23 08:43
家财万贯还得回很多贴哦
作者:
leeking
时间:
2018-1-1 08:48
我来看看！谢谢
作者:
apple0
时间:
2018-1-1 10:01
细胞治疗行业
作者:
昕昕
时间:
2018-1-3 11:02
加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~
作者:
墨玉
时间:
2018-1-4 09:54
加油啊！！！！顶哦!!!!!支持楼主，支持你~
作者:
s06806
时间:
2018-1-5 00:01
怎么就没人拜我为偶像那?? ~
作者:
doc2005
时间:
2018-1-12 21:59
又看了一次
作者:
墨玉
时间:
2018-1-23 01:45
活着，以死的姿态……
作者:
alwaysniu
时间:
2018-1-28 17:56
不错啊! 一个字牛啊!
作者:
popobird
时间:
2018-2-7 05:05
初来乍到，请多多关照。。。
作者:
甘泉
时间:
2018-2-11 20:20
老大,我好崇拜你哟
作者:
依旧随遇而安
时间:
2018-2-20 00:54
不知道说些什么
作者:
ikiss
时间:
2018-3-1 06:25
楼主good
作者:
8666sea
时间:
2018-3-4 08:10
哈哈，看的人少，回一下
作者:
ladybird
时间:
2018-3-7 20:14
厉害！强~~~~没的说了！
作者:
依旧随遇而安
时间:
2018-3-21 05:41
先顶后看
作者:
我心飞翔
时间:
2018-4-7 16:01
这个站不错！！
作者:
lab2010
时间:
2018-4-12 23:11
…没我说话的余地…飘走
作者:
红旗
时间:
2018-4-17 02:03
是楼主原创吗
作者:
dglove
时间:
2018-4-24 22:54
对不起，我走错地方了，呵呵
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