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标题: iPS的EB分化成beating的团块后如何弄成单个细胞来染色 [打印本页]

作者: frankieisme 时间: 2013-2-21 01:15 标题: iPS的EB分化成beating的团块后如何弄成单个细胞来染色

iPS的EB分化成beating的团块后如何弄成单个细胞来染色?

作者: Jonathan 时间: 2013-2-21 12:05

胶原酶4，消化30分钟，然后胰酶5分钟。搞定

作者: frankieisme 时间: 2013-2-22 04:43

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我用0.25%胰酶，另外机械吹打得方法都试过，效果不好，细胞大多噢度死掉了。你做的时候胶原酶IV和胰酶的浓度呢？

作者: Jonathan 时间: 2013-2-22 11:14

胶原酶 1mg/ml，胰酶是用0.05的。

作者: 若兰汀 时间: 2013-2-22 11:44

回复 Jonathan 的帖子& l! ~+ a6 y I7 H8 p3 U

胰酶是用0.05%的，含EDTA吗,请指教

作者: Jonathan 时间: 2013-2-22 16:25

回复若兰汀的帖子7 O+ p" L* r) J' n# D( V
' O& T* V: E& E- }2 U+ N4 e: D/ r
是的。有一个很重要的步骤，就是胶原酶4和胰酶用之前，一定要先预热到37度。切记切记。这样处理，最后很少死细胞，而且cluster也都基本散开了。

作者: frankieisme 时间: 2013-2-23 05:16

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你是做小鼠还是人的iPS 细胞?

作者: Jonathan 时间: 2013-2-23 08:51

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人的比较多。鼠的少一点。大鼠和猪的做过一些

作者: frankieisme 时间: 2013-2-26 04:28

回复 Jonathan 的帖子( u9 a7 K/ b2 z8 ?' } h

人的iPS是feeder还是无feeder培养的?分化的过程是悬滴or贴壁?加了那些因子?

作者: Jonathan 时间: 2013-2-26 11:14

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全程无feeder，包括诱导。分化过程是用自己的protocol，最近在写，还没发。

作者: frankieisme 时间: 2013-2-26 22:49

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人iPS的培养液是用的mTeSR还是自己配的?传代是用酶or机械方法?

作者: Jonathan 时间: 2013-2-27 10:15

回复 frankieisme 的帖子/ Z a& \% `8 J6 `1 @* S# f) l
( |: Q4 f3 _1 t) b2 ?7 ~' J' a
我用们TeSR1比较多，也有时候用E8.传代是用dispase，或者用accutase都可以。用dispase的话，就是先消化，然后机械刮成小碎片

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